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PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)是最早被发现具有蛋白质和脂类磷酸酶活性的抑癌因子,随着研究深入发现,PTEN作为肿瘤抑制因子,在调控细胞增殖、分化、凋亡等一系列病理生理过程中同样发挥着重要作用,但相对哺乳动物,PTEN在家禽中的研究信息有限。本试验以鸡胚和雏鸡为研究对象,通过实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)和免疫组化等技术,探讨了PTEN在鸡胚和雏鸡发育过程中的组织分布和发育变化,同时探索了雏鸡饮水中添加绿茶对PTEN基因表达的影响,以期为PTEN在雏鸡发育过程中生理和病理上的研究提供基础资料。1.PTEN转录的组织差异性。本试验在鸡胚孵化的第18天(E18)和孵化后第15天(D15)取心脏、皮肤、胸大肌、盲肠、肺、空肠、十二指肠、回肠、下丘脑、腺胃、肾脏、肝脏、法氏囊、盲肠扁桃体、胸腺和脾脏等器官,q RT-PCR方法探索PTEN在鸡胚和雏鸡不同组织中的分布情况,结果表明:在鸡胚孵化第18天,Pten m RNA在组织中相对表达水平显示为骨骼肌和免疫器官>内脏器官>消化器官。然而,在出壳后第15天,所有检测到的组织中,心脏中Pten m RNA的表达最高,其次是肝脏,腺胃和肾脏,分别是心脏的89.99%,41.23%和39.63%(P<0.05)。其他组织中Pten m RNA的表达非常低,仅为心脏的1.2%-19.47%(P<0.05)。2.PTEN转录的发育性变化。本试验分别在鸡胚孵化E15,E18,E20和孵化后D1,D5,D10,D15取法氏嚢、脾脏、胸腺、胸大肌、肝脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠等组织,通过免疫组化和q RT-PCR方法探索PTEN在不同组织中表达的发育性变化,结果表明:从D1到D5,雏鸡法氏囊中Pten m RNA的表达呈上升趋势。与E15相比,E18和E20 Pten m RNA的相对表达水平增加了约3.02倍和3.11倍(P<0.05);Pten m RNA表达的相对水平在D5达到最高水平,约是E15的7倍(P<0.05)。D1到D5,Pten m RNA的相对表达水平在脾脏和胸腺中呈下降趋势。胸腺中Pten m RNA的相对表达水平在D1达到最高,约为E15的3.79倍(P<0.05)。在脾脏中Pten m RNA表达在前期变化不大,但在D10迅速下降,在D15又明显上升,分别是E15的0.37倍和1.75倍(P<0.05)。在骨骼肌中Pten m RNA相对表达水平呈上升趋势,在D15达到最高水平,约是E15的5.1倍(P<0.05)。而肝脏中Pten m RNA相对表达水平在D1达到最高水平,约是E15的10.46倍(P<0.05)。肠道中,十二指肠和回肠Pten m RNA相对表达水平的趋势相同,呈先上升后下降再上升趋势。在十二指肠中Pten m RNA表达的相对水平在D5达到最高水平,约是E15的4.1倍(P<0.05)。而回肠中Pten m RNA表达的相对水平在D1达到最高水平,约是E15的16.6倍(P<0.05)。在空肠中Pten m RNA表达的相对水平在D10达到最高水平,约是E15的1.46倍(P<0.05)。而在盲肠中Pten m RNA表达的相对水平在E18达到最高水平,约是E15的3.7倍(P<0.05)。法氏囊中的PTEN免疫阳性细胞(PTEN-immunopositive cells,PTEN-ip)在孵化前主要分布在上皮细胞,孵化后主要在法氏囊的滤泡中表达。在脾脏中,PTEN-ip主要在动脉周围组织淋巴鞘中表达。在胚胎期,PTEN-ip在胸腺皮质和髓质中均有表达;孵化后,PTEN-ip主要分布在髓质。骨骼肌中PTEN免疫阳性细胞在在胚胎期主要在细胞核中表达,到了胚胎期第20天可以明显观察到PTEN-ip在细胞质中呈点状出现;出壳后可以观察到PTEN-ip主要分布在细胞质,只有少部分细胞核有阳性表达。肝脏中PTEN-ip在胚胎期主要在细胞核中表达;出壳后第1天PTEN-ip不仅在细胞质中表达,还在细胞核中表达。3.绿茶对PTEN转录的影响。本试验在雏鸡饲养的第7天(7d)开始在试验鸡群中每天灌服1 m L的绿茶水(10 g茶叶/100 m L水),并在喂养后7d、12d、15d、18d、21d(即灌服绿茶水后0d、5d、8d、11d、14d)取法氏囊、脾脏、十二指肠、空肠,q RT-PCR检测绿茶对PTEN在这些组织中表达的影响。结果表明:在空白组法氏囊中,Pten m RNA相对表达水平在18d(即喂绿茶水后11d)达到最高,约是7d(即喂绿茶水0d)的4.3倍(P<0.05);在12d和18d(即喂绿茶水后5d和11d),空白组与实验组相比差异显著(P<0.05);18d(即喂绿茶水后11d),空白组Pten m RNA相对表达水平约是绿茶组的2.03倍(P<0.05)。在空白组脾脏中,Pten m RNA相对表达水平整体呈上升趋势,12d(即喂绿茶水后5d)绿茶组Pten m RNA的表达明显低于空白组,约为空白组的60%(P<0.05);在15d(即喂绿茶水后8d)又明显高于空白组,绿茶组Pten m RNA相对表达水平约为空白组的2.98倍(P<0.05)。在空白组十二指肠中,Pten m RNA相对表达水平整体呈下降趋势,在21d(即喂绿茶水后14d)达到最低,约是7d(即喂绿茶水0d)的11.5%(P<0.05);21d时(即喂绿茶水后14d)空白组与实验组Pten m RNA的相对表达水平差异显著,绿茶组Pten m RNA相对表达水平大概是空白组的9.7倍(P<0.05)。在空白组空肠中,Pten m RNA相对表达水平呈先上升后下降趋势,12d(即喂绿茶水后5d)空白组与实验组Pten m RNA的相对表达水平差异显著,空白组Pten m RNA相对表达水平约为绿茶组的3.2倍(P<0.05)。结论:PTEN在鸡胚和雏鸡组织中广泛存在,其表达存在时间上和空间上的差异性;PTEN在不同类型组织的发育性变化呈现的规律不同,发育时期不同,其表达位置也出现变化;绿茶对免疫器官和肠道组织的影响变化不同。