荔枝核总黄酮促进HepG2细胞凋亡并抑制其迁移与侵袭的研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nicop
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目的:观察荔枝核总黄酮(TFL)对人肝癌细胞Hep G2细胞在增殖、迁移与侵袭等方面的影响,并测定TFL干预后Hep G2内凋亡相关基因的转录水平及相关蛋白表达情况,为荔枝核治疗肝癌的研究提供理论依据。方法:通过MTT法测定TFL以及阳性组药物(顺铂)对Hep G2细胞增殖的影响,并分别计算二者在24h与48h对Hep G2的半抑制浓度(IC50),选取最佳的作用时间与浓度进行后续实验。将Hep G2细胞分为空白组、阳性组、TFL低剂量组、TFL中剂量组、TFL高剂量组。细胞划痕与Transwell迁移实验测定TFL对Hep G2细胞迁移活动的影响;Transwell侵袭实验测定TFL对Hep G2细胞侵袭活动的影响。蛋白质印迹法(Western Blot)测定TFL对Hep G2细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8蛋白质表达的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定TFL对Hep G2细胞内上述蛋白质对应基因转录水平的影响。结果:1.MTT测定TFL及顺铂的细胞毒性使用不同浓度的TFL(TFL 80μg/ml、TFL 120μg/ml、TFL 160μg/ml、TFL 200μg/ml、TFL 240μg/ml)干预Hep G2细胞24h、48h后,通过MTT法检测TFL对Hep G2细胞的细胞活力的影响。结果显示,在作用24h时,各浓度组细胞活力与空白组比较具有显著差异(P<0.01),其中160μg/ml、200μg/ml、240μg/ml组的细胞活力均低于50%;在作用48h时,各浓度组细胞活力与空白组比较具有显著差异(P<0.01),其中120μg/ml、160μg/ml、200μg/ml、240μg/ml组的细胞活力均低于50%。TFL在作用24h时,对于Hep G2细胞的IC50为136.7±2.40μg/ml;48h时IC50为106.8±1.11μg/ml。使用不同浓度的顺铂(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml、128μg/ml)干预hep G2细胞24h、48h后,通过MTT法检测其对Hep G2细胞增殖活性的影响。结果显示,在作用24h时,各浓度组细胞活力除1μg/ml组、2μg/ml组外,与空白组比较均具有显著差异(P<0.01),其中128μg/ml组的细胞活力低于50%;在作用48h时,各浓度组细胞活力与空白组比较均具有显著差异(P<0.01),其中8μg/ml组、16μg/ml组、32μg/ml组、64μg/ml组的细胞活力均低于50%。顺铂在作用24h时,对于Hep G2细胞的IC50为58.48±2.04μg/ml;48h时的IC50为5.15±0.56μg/ml。后续实验分组如下:空白组、阳性组(顺铂60μg/ml)、TFL低剂量组(70μg/ml)、TFL中剂量组(140μg/ml)、TFL高剂量组(210μg/ml)2.细胞划痕药物干预后,各组Hep G2细胞迁移的距离(P<0.01)以及细胞迁移率(P<0.01)显著低于空白组。其中空白组迁移距离为70.64±8.74μm,迁移率为10.81%±1.75%;阳性组迁移距离为44.55±2.96μm,迁移率为6.78%±0.711%;TFL低剂量组迁移距离为35.44±6.05μm,迁移率为5.8%±1.37%;TFL中剂量组迁移距离为16.80±9.75μm,迁移率为2.74%±1.58%。TFL高剂量组在干预24h后,细胞划痕损毁严重,无法计算其迁移距离,故无结果。3.Transwell迁移实验药物干预后,各组Hep G2细胞穿膜的数量比空白组显著减少(P<0.01),空白组穿膜数为244±9个;阳性组穿膜数为118±9个;TFL低剂量组穿膜数为75±3个;TFL中剂量组穿膜数为52±4个;TFL高剂量组穿膜数为40±10个。4.Transwell侵袭实验药物干预后,各组Hep G2细胞穿膜的数量比空白组显著减少(P<0.01),空白组穿膜数为148±16个;阳性组穿膜数为85±5个;TFL低剂量组穿膜数为48±7个;TFL中剂量组穿膜数为28±6个;TFL高剂量组穿膜数为21±4个。5.凋亡相关蛋白表达情况结果显示:与空白组相比,不同剂量TFL的干预能显著增加Bax蛋白的表达量(P<0.05);TFL高剂量组能显著降低Bcl-2蛋白的表达量(P<0.05),且能显著提高Bax/Bcl-2的比值(P<0.05)。TFL中剂量能显著提高Caspase-3蛋白与Caspase-8蛋白的表达量(P<0.05),TFL低剂量能显著提高Caspase-3蛋白的表达量(P<0.05)。6.凋亡相关基因转录情况结果显示,与空白组相比,TFL低剂量、中剂量能显著增加Bax基因的转录水平(P<0.05);所有剂量的TFL干预都能显著降低Hep G2细胞Bcl-2基因的转录水平(P<0.01);TFL中剂量能显著提高Caspase-3基因与Caspase-8基因的转录水平(P<0.05);TFL低剂量组尚能显著提高Caspase-3基因的转录水平(P<0.05)。结论:1.TFL可以显著抑制Hep G2细胞的增殖过程。2.TFL可能通过外源性及内源性凋亡途径促进Hep G2细胞凋亡。3.TFL可以显著减弱Hep G2细胞迁移与侵袭的能力,可能与TFL对Hep G2细胞促凋亡作用相关。
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