【摘 要】
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近年来在“北牛南运”的肉牛养殖模式下,四川作为育肥牛的重要输入基地,采用抗菌素对因运输应激、异地育肥而引发的各种呼吸道疾病、胃肠道疾病进行预防和治疗不可避免,这难免造成耐药细菌的增加,对人类健康与公共安全造成潜在威胁。据调查,产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBLs）是导致各地细菌多重耐药的主要原因之一。本研究通过调查四川部分地区肉牛源产ESBL
【基金项目】
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财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助（肉牛牦牛,CARS-37）； 国家现代农业产业技术体系四川肉牛创新团队项目（SCCXTD-2020-13）；
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近年来在“北牛南运”的肉牛养殖模式下,四川作为育肥牛的重要输入基地,采用抗菌素对因运输应激、异地育肥而引发的各种呼吸道疾病、胃肠道疾病进行预防和治疗不可避免,这难免造成耐药细菌的增加,对人类健康与公共安全造成潜在威胁。据调查,产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBLs）是导致各地细菌多重耐药的主要原因之一。本研究通过调查四川部分地区肉牛源产ESBLs大肠杆菌的耐药情况并结合分子分型,探讨了该地区肉牛源大肠杆菌的耐药特性和流行情况,为指导临床生产合理用药与动物源细菌耐药性监测提供数据支持。主要内容如下:1.肉牛源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析2019～2020年,从四川肉牛养殖主要区县采集肉牛直肠拭子样品共计269份,通过选择培养基、染色镜检及特异性PCR进行分离纯化鉴定,共获得252株大肠杆菌,分离率为93.7%。通过K-B法检测分离株对常见抗菌素的敏感性,结果显示,252株大肠杆菌对12种受试抗菌素的耐药率范围在0～56.7%,其中对氨苄西林、头孢唑林、头孢噻呋、氟苯尼考及四环素的耐药率在34.5%～56.7%,而对多粘菌素B及亚胺培南均不耐药。其中不耐药菌株占33.7%（85/252）;而耐3种及以上抗菌药的菌株占50.0%（126/252）,其中4耐、6耐及7耐的大肠杆菌各占约10.0%,以6耐菌株最多,占比为10.3%（26/252）,优势耐药谱为AMP/KZ/EFT/TE/FFC/SXT。综上,四川肉牛源大肠杆菌的分离率较高,但整体耐药水平相对于国内部分其他地区牛源大肠杆菌较低,而对β-内酰胺类抗菌素的耐药率较高。2.肉牛源产ESBLs大肠杆菌的耐药特性分析采用CHROMagar ESBL培养基显色法和双纸片协同扩散法对252株大肠杆菌进行ESBLs表型鉴定,结果显示产ESBLs菌株有109株,阳性率为43.3%。产ESBLs菌株对受试抗菌素的耐药率普遍显著高于非产ESBLs菌株（P＜0.05）,且对氨苄西林、头孢唑林及头孢噻呋的耐药率高达91.0%以上。产ESBLs菌株对3种以上受试抗菌素（4耐～9耐）的耐药率也显著高于非产ESBLs菌株（P＜0.05）,且其多重耐药率达到99.1%。检测产ESBLs菌株的基因型以CTX-M型、TEM型、OXA型为主,分别为55.0%、39.4%、29.4%,另检出3株SHV-11亚型（2.8%）。ESBLs基因型模式分为9种,不同模式或数量的ESBLs基因型与耐药表型无明显相关性。综上表明四川肉牛源产ESBLs大肠杆菌呈较高水平流行,其耐药率普遍高于非产ESBLs菌株,并表现为多重耐药,其ESBLs基因型模式也复杂多样。3.肉牛源产ESBLs大肠杆菌的系统进化分群及MLST分型利用大肠杆菌的Chu A、yja A和Tsp E4.C2基因检测结果,将109株产ESBLs菌株分为A、B1、B2、D群,分别占42.2%（46/109）、39.4%（43/109）、15.6%（17/109）、2.8%（3/109）;A、B1、B2/D群的产ESBLs菌株对庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考及复方新诺明等抗菌素的耐药率存在显著差异（P＜0.05）。选取其中45株多重耐药代表菌株进行MLST分型,结果可分为31种ST型,以ST48型最多,占比为8.9%（4/45）,其次为ST398、ST4977、ST7130型各占6.7%（3/45）,且发现2种新ST型,编号分别为STn-1、STn-2。聚类分析表明四川肉牛源产ESBLs大肠杆菌的ST型呈现高度多态性,主要流行ST型优势不明显,其ST型与耐药表型具有一定相关性。结论:1)四川肉牛粪便中大肠杆菌的分离率达93%以上,其耐药水平低于国内部分其他地区,但对β-内酰胺类抗菌素的耐药率却较高。2)四川肉牛源产ESBLs大肠杆菌呈较高水平流行,其对常见抗菌素普遍耐药,且多重耐药率高达99.1%;检出CTX-M、TEM、OXA、SHV四种ESBLs基因型,共分为9种ESBLs基因型模式。3)A、B1、B2/D群的产ESBLs大肠杆菌对一些特定抗菌素的耐药性存在显著差异,产ESBLs多重耐药代表菌株的ST型也呈现高度多态性,这可能与该地区牛只来源广泛有关,提示对该地区致病性和耐药性大肠杆菌的防控难度较大,需进一步加强监测。
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