【摘 要】
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心力衰竭是高血压、冠心病等多种心血管疾病发展的终末阶段,以心肌重构及心室顺行性降低为主要特点,是引起心血管病死亡的首要原因。心肌纤维化发生时,成纤维细胞转变为肌成纤维细胞,分泌炎症相关因子,细胞外基质蛋白沉积,促进心肌重构的进程。环状RNA（circular RNAs,circRNAs）是一种闭合环状的长链非编码RNA,越来越多研究证实circRNAs参与心肌纤维化的发生发展过程,因此,深入研究c
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（编号:81770264）；
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心力衰竭是高血压、冠心病等多种心血管疾病发展的终末阶段,以心肌重构及心室顺行性降低为主要特点,是引起心血管病死亡的首要原因。心肌纤维化发生时,成纤维细胞转变为肌成纤维细胞,分泌炎症相关因子,细胞外基质蛋白沉积,促进心肌重构的进程。环状RNA（circular RNAs,circRNAs）是一种闭合环状的长链非编码RNA,越来越多研究证实circRNAs参与心肌纤维化的发生发展过程,因此,深入研究circRNAs调节心肌纤维化的作用机制,可为心力衰竭的治疗研究提供新的策略,具有重要意义。我们课题组前期已证实小鼠环状RNA circRNA005647通过结合miR-27b-3p解除对下游靶基因PPAR-γ的抑制作用,从而发挥抑制小鼠心肌纤维化的作用。而与其同源的人环状RNA circRNA0036176在心衰病人心肌组织中表达亦上调,但其在心肌纤维化中的调控作用尚不明确。目的:探究circRNA0036176对心肌纤维化的调控作用及可能的分子机制。方法:1.通过RT-qPCR检测人心肌组织（包括22例器官捐赠健康志愿者和26例心力衰竭患者）中circRNA0036176及其宿主基因Myo9a的表达水平。2.原代分离、培养人心房肌成纤维细胞（human atrial fibroblasts,HAFs）。3.血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）处理 HAFs,RT-pPCR 检测 circRNA0036176 和 Myo9a 的表达水平。4.原代分离、培养C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞（mouse cardiac fibroblasts,mCFs）。5.分别利用腺病毒介导在HAFs、mCFs中过表达circRNA0036176,通过RT-qPCR和Western blot检测纤维化相关基因的表达水平。6.EdU、流式细胞术和Trans-well实验检测circRNA0036176对mCFs增殖和迁移能力的影响。7.通过双萤光素酶报告基因实验、RNA反义纯化技术（RAP）和 RNA pull down 实验鉴定 circRNA0036176 与微小 RNA miR-218-5p 的结合作用。8.利用mCFs进行干预实验,明确miR-218-5p介导circRNA0036176对心肌纤维化表型的抑制作用。结果:1.CircRNA0036176和宿主基因myo9A在心力衰竭患者心肌组织中表达上调。2.Ang-Ⅱ诱导的HAFs纤维化细胞模型中,circRNA0036176及宿主基因Myo9a表达下调。3.分别在HAFs和mCFs中过表达circRNA0036176后,COL1A1,COL3A1,TGF-β1和α-SMA表达一致下调。4.EdU,流式细胞术和Trans-well实验结果显示,circRNA0036176对mCFs增殖、迁移有抑制作用。5.双萤光素酶报告基因实验、RAP和RNA pull down实验证实miR-218-5p与circRNA0036176间存在结合作用。6.分别在HAFs和mCFs中过表达miR-218-5p 可促进 COL1A1、COL3A1、TGF-β1 和 α-SMA 的表达。7.过表达miR-218-5p可减弱circRNA0036176对mCFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:1.CircRNA0036176在心衰心肌组织中表达上调。2.CircRNA0036176可抑制心肌成纤维细胞纤维化相关基因的表达以及细胞增殖、迁移。3.CircRNA0036176可通过特异结合miR-218-5p来发挥抑制心肌纤维化的作用。
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