【摘 要】
：
目的:以实验性自身免疫性重症肌无力（Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）小鼠模型和C2C12成肌细胞为研究对象,探讨龟鹿二仙胶治疗重症肌无力的可能作用机制,为临床应用提供实验基础。方法:1.90只健康雌性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法随机选择10只作为正常组,80只作为造模组。用鼠源性AChR-α亚基97-116肽段制备免疫乳剂,在每
论文部分内容阅读
目的:以实验性自身免疫性重症肌无力（Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）小鼠模型和C2C12成肌细胞为研究对象,探讨龟鹿二仙胶治疗重症肌无力的可能作用机制,为临床应用提供实验基础。方法:1.90只健康雌性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法随机选择10只作为正常组,80只作为造模组。用鼠源性AChR-α亚基97-116肽段制备免疫乳剂,在每只造模小鼠背部和双足垫各取2点注射含50μg鼠源性AChR-α亚基97-116肽段的乳剂200μL,正常组小鼠在相同部位注射佐剂与磷酸盐缓冲液（Phosphate buffered solution,PBS）混合的乳剂200μL。首次免疫后的第30天、第56天、第95天在小鼠相同部位注射同等剂量免疫乳剂,进行第一次、第二次、第三次加强免疫。初次免疫后第14周,采用Lennon分级法评估肌力、酶联免疫吸附（Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）法检测血清乙酰胆碱受体抗体（Acetylcholine receptor antibody,AChR-Ab）水平、新斯的明实验、肌电图检测等综合判断EAMG模型是否成功。2.符合EAMG模型纳入标准的小鼠随机分为模型组（EAMG）,龟鹿二仙胶低、中、高剂量组（TDG-L、TDG-M、TDG-H）,泼尼松组（PDN）,每组10只。灌胃给药5周后,进行肌力评分,ELISA法检测血清AChR-Ab和IL-1β、IL-2、IL-3、IL-12P40、IL-13、GM-CSF、MCP-1、MIP-1β等细胞因子水平;3.将30只健康雌性C57BL/6小鼠,随机分为龟鹿二仙胶含药血清组和空白血清对照组,每组15只。诱导C2C12细胞分化为肌管细胞,免疫荧光法观察不同浓度含药血清和空白血清对肌管细胞的乙酰胆碱受体（Acetylcholine receptor,AChR）数量和长度的影响。结果:1.造模小鼠符合EAMG模型纳入标准。EAMG小鼠毛发不泽,行动迟缓,抓力下降;正常小鼠毛发光泽,行动灵活,抓力正常。与正常组相比,EAMG小鼠Lennon评分显著升高（P＜0.01）;EAMG小鼠悬挂时间与正常组相比显著降低（P＜0.01）;与正常组相比,EAMG小鼠血清AChR-Ab显著升高（P＜0.01）;EAMG组小鼠新斯的明实验和肌电图的结果阳性。2.Lennon分级法观察各组小鼠治疗后肌力症状:EAMG组的Lennon评分高于正常组（P＜0.01）;与EAMG组相比,龟鹿二仙胶中、高剂量组和泼尼松组的评分显著降低（P＜0.01）;与龟鹿二仙胶低剂量组相比,龟鹿二仙胶中剂量组的评分显著降低（P＜0.05）。3.ELISA检测观察各组小鼠治疗后血清AChR-Ab水平的变化:EAMG组的AChR-Ab水平显著高于正常组（P＜0.01）;与EAMG组相比,龟鹿二仙胶中、高剂量组的AChR-Ab水平显著降低（P＜0.01）;与龟鹿二仙胶低剂量组相比,龟鹿二仙胶中剂量组的AChR-Ab水平显著降低（P＜0.01）;与龟鹿二仙胶高剂量组相比,泼尼松组AChR-Ab水平降低（P＜0.05）。4.ELISA检测观察各组小鼠治疗后血清细胞因子水平的变化:与EAMG组相比,龟鹿二仙胶治疗后小鼠血清中IL-1β、IL-2、IL-3、IL-12P40、IL-13、GMCSF、MCP-1、MIP-1β的数值升高（P＜0.05）;血清中KC的数值降低（P＜0.05）。5.免疫荧光法观察龟鹿二仙胶含药血清对肌管细胞AChR聚集的影响:在没有聚集蛋白Agrin干预的情况下,含药血清组随着药物浓度的增加,20%浓度的含药血清能够促进AChR簇的聚集;在聚集蛋白Agrin干预的情况下,龟鹿二仙胶含药血清组AChR簇的数量和长度均高于空白血清对照组（P＜0.05）。结论:龟鹿二仙胶能够改善EAMG小鼠的肌力评分,降低AChR-Ab水平,缓解肌无力症状,其机制可能通过上调血清中IL-1β、IL-2、IL-3、IL-12P40、IL-13、GM-CSF、MCP-1、MIP-1β水平,下调血清中KC水平,调节细胞因子网络,影响机体的免疫应答;龟鹿二仙胶含药血清能够剂量依赖性地促进C2C12肌管细胞AChR的聚集,协同聚集蛋白Agrin促进肌管细胞AChR的聚集,改善神经肌肉接头的信号传递功能。
其他文献
目的:明确英夫利西单抗（Infliximab）对出血性脑卒中小鼠脑部炎症反应的改善作用及机制,探索英夫利西单抗对脑出血小鼠预后的影响。方法:1.实验动物分组:本实验共选择C57BL/6 10月龄雄性小鼠144只,体重均在24g-26g,随机分为四组:（1）假手术组:36只,仅在左侧尾状核处颅骨打孔,微量注射器只进针不泵入胶原酶;（2）假手术+英夫利西单抗组:36只,仅在左侧尾状核处颅骨打孔,微量注
研究背景:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是临床最常见的消化系统恶性肿瘤,具有较高的发病率与死亡率,严重威胁全球人类健康。尽管目前结直肠癌的诊治技术不断进步,但仍有大量患者可能出现不良反应、复发或转移,因此寻找结直肠癌新疗法意义重大。黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）是祖国传统中药材黄芪的重要活性成分,具有广谱的抗肿瘤效果,近些年用于抗肿
目的:分析仑伐替尼对肝癌患者肠道菌群的影响,初步筛选出仑伐替尼治疗肝癌患者的潜在微生物标志物。方法:1.收集接受仑伐替尼治疗的肝癌患者的粪便标本进行肠道微生物检测。实验分组:仑伐替尼治疗前为对照组,仑伐替尼治疗后为实验组;3周为1个治疗周期,仑伐替尼治疗1周期为Time1组,仑伐替尼治疗2周期为Time2组。2.采用SPF级BALB/c小鼠按性别随机分为雌性对照组CF,雄性对照组CM,雌性实验组T
目的:基于网络药理学研究银杏叶提取物防治老年性聋的的潜在靶点通路,并通过基础实验探讨银杏叶提取物对老年性聋大鼠模型的听功能、耳蜗组织形态学和自噬相关蛋白表达的影响。方法:1.运用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选银杏叶的有效成分,Gene Cards数据库获得老年性聋相关靶点基因,微生信对基因本体论（GO）、基因组百科全书（KEGG）进行功能富集。2.将45只SD大鼠随机分为5组（n=9）:
目的:利用ox-LDL和LPS诱导RAW264.7巨噬细胞造成炎症模型,观察小檗碱对于炎症情况下巨噬细胞炎症因子分泌以及巨噬细胞极化的调控作用与PPAR-γ/HO-1通路的关系,为小檗碱抗动脉粥样硬化提供依据。方法:1.采用ox-LDL和LPS共同诱导RAW264.7巨噬细胞成为泡沫细胞,实验共分为7组:对照组、模型组（ox-LDL+LPS）、小檗碱组（ox-LDL+LPS+小檗碱）、小檗碱+GW
目的:验证DNMT1在胃癌细胞中的异常表达,观察DNMT1对胃癌细胞迁移、增殖、凋亡的作用,并通过生信技术筛选DNMT1的上游分子机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR（RT-q PCR）和蛋白印迹（western blot）检测DNMT1在正常胃上皮细胞（GES-1）和胃癌细胞（MGC-803、SGC-7901、MKN-28）中m RNA水平和蛋白水平的相对表达量。2.使用小干扰RNA（si R
研究背景:正常情况下,角膜是透明无血管的,这种生理结构是形成良好视力的必要条件。当眼部发生炎症、感染、缺氧、创伤等情况时会导致角膜新生血管的形成（Corneal Neovascularization;CNV）从而破坏角膜的透明性,如果不及时治疗可能会导致严重的视力下降或者失明。角膜新生血管是全球第四大失明原因,是大部分发展中国家第二大失明原因[1,2]。近年来,角膜新生血管的患病人群有逐渐年轻化的
目的乳腺癌是女性常见恶性肿瘤。虽然现在已有许多其他新医学研究及方法都已能够基本阐明了乳腺癌及其确切的一些主要临床发病规律或重要病因,但其对于乳腺癌真正致病的一些确切分子发生规律或其分子机制目前也仍然显得很模糊。由于现阶段我国的乳腺癌恶性肿瘤治疗具有发病率较高、转移率较大和死亡率也较高等特点,使得乳腺癌筛查、诊断和治疗方面成为了大众关注的焦点。视黄醇结合蛋白7（Retinol-binding pro
研究背景:心力衰竭是多种心血管疾病的严重表现和最终归宿,其高发病率、高死亡率的特点使得心力衰竭成为全球范围内重大的公共健康问题。肾素-血管紧张素系统（RAS）是由一系列肽类激素和相关酶组成的神经内分泌系统,在调节和维持心肾功能稳态及电解质体液平衡中起着关键作用,其过度激活在心力衰竭发生发展过程中起着重要的病理作用。因此抑制RAS系统的过度激活不仅可以减轻心力衰竭患者的临床症状,更是延缓心衰进程的关
研究目的:腹部提压心肺复苏（Active abdominal Compression-decompression Cardiopulmonary Resuscitation,AACD-CPR）被应用于拯救伴有胸外按压禁忌症的心搏骤停患者,在家猪心肺复苏模型中,本研究比较了AACD-CPR和标准胸外按压心肺复苏（Standard cardiopulmonary resuscitation,STD-C