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目的：了解酒精性脂肪肝(AFLD)小鼠肝脏能量代谢变化及葛花解酒涤脂汤的干预作用。
方法：将64只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组（6只）、模型组(10只)、葛花解酒涤脂汤高剂量干预组(12只)、葛花解酒涤脂汤中剂量干预组（12只）、葛花解酒涤脂汤低剂量干预组(12只)及白藜芦醇干预组(12只)。采用美国国立卫生研究院酒精滥用及酒精中毒研究所(NIAAA)的方法制备C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型，经过组织病理学鉴定模型制备成功后，分别按相应组别灌胃给予葛花解酒涤脂汤高、中、低剂量(4.90，2.45，1.23g·kg-1·d-1)及白藜芦醇（0.4g·kg-1·d-1），连续灌胃9天后处死小鼠，收集肝组织样本。行组织病理学H&E及油红O染色镜检观察肝组织脂肪变性、肝细胞脂肪沉积情况;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定肝组织三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量，计算AMP/ATP、总腺苷酸池(TAN)及能荷(EC);采用分光光度法检测肝组织Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶、SDH活性及微量法检测肝糖原含量;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫组织化学方法分别检测肝组织SIRT1、AMPKα2、ACC、PGC-1αmRNA表达水平及SIRT1、AMPK蛋白表达水平。
结果：葛花解酒涤脂汤高剂量干预组、中剂量干预组及白藜芦醇干预组小鼠肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润及肝细胞脂肪沉积较模型组显著减轻，但葛花解酒涤脂汤低剂量干预组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润及肝细胞脂肪沉积较模型组未见明显改善;RP-HPLC检测发现，AFLD小鼠肝组织EC水平较正常对照组显著降低（P＜0.05），葛花解酒涤脂汤中剂量干预组及白藜芦醇干预组EC水平较正常组显著升高（P＜0.05），葛花解酒涤脂汤高剂量干预组EC水平与正常对照组相似(P＞0.05);AFLD模型组小鼠肝组织AMP/ATP水平较正常组显著升高(P＜0.05)，且AFLD小鼠肝组织AMP/ATP水平显著高于各实验组(P＜0.01);葛花解酒涤脂汤高、中剂量干预组及白藜芦醇干预组AMP/ATP水平较模型组显著下降(P＜0.05)。各实验组小鼠肝组织Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶、SDH活性及肝糖原含量检测结果显示，模型组、葛花解酒涤脂汤中剂量干预组及白藜芦醇干预组均具有同正常组相似的Na+K+-ATP酶活性(P＞0.05);葛花解酒涤脂汤高剂量干预组Na+K+-ATP酶活性显著低于正常对照组、模型组及白藜芦醇二干二预组(P＜0.05)，与葛花解酒涤脂汤中剂量二干二预组相似（P＞0.05）。AFLD小鼠肝组织Ca2+Mg2+-ATP酶活性、SDH活性显著低于正常对照组小鼠(P＜0.05);与模型组比较，葛花解酒涤脂汤干预组能够轻度增加Ca2+Mg2+-ATP酶活性，但差异无统计学意义(P＞0.05)。葛花解酒涤脂汤干预组能够显著增加SDH活性(P＜0.05)。AFLD模型组及各干预组糖原含量较正常对照组显著增加(P＜0.05)，但糖原含量在AFLD模型组及各干预组小鼠肝组织内无差异性（P＞0.05）。本文qRT-PCR检测结果显示，葛花解酒涤脂汤高剂量干预组具有比正常对照组显著增加AMPKα2mRNA表达水平（P＜0.01），葛花解酒涤脂汤中剂量干预组、白藜芦醇干预组具有同正常对照组相似的AMPKα2mRNA表达水平(P＞0.05)，AFLD小鼠肝组织AMPKα2mRNA表达水平显著低于正常组及干预组(P＜0.05);白藜芦醇干预能显著增加小鼠肝组织SIRT1mRNA表达水平(P＜0.01)，葛花解酒涤脂汤高、中剂量干预组具有同正常对照组相似的SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平(P＞0.05)，AFLD小鼠肝组织SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平显著低于各实验组（P＜0.05）;各实验组小鼠肝组织ACC mRNA表达水平相似（P＞0.05）。与qRT-PCR检测结果一致，IHC检测也提示模型组小鼠肝组织内SIRT1、AMPK蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P＜0.05)，葛花解酒涤脂汤高、中剂量及白藜芦醇干预能够显著增加小鼠肝组织细胞质、细胞核SIRT1、AMPK蛋白表达水平(P＜0.05)。
结论：1、再次验证了葛花解酒涤脂汤能够有效改善AFLD小鼠肝脏脂肪变性;
2、葛花解酒涤脂汤干预能够上调AFLD小鼠肝组织EC值及降低AMP/ATP值，增加SDH及降低Na+K+-ATP酶活性，上调肝组织SIRT1、PGC-1α、AMPKα2mRNA及蛋白表达水平;
3、AFLD小鼠肝脏能量代谢减弱，葛花解酒涤脂汤干预能够有效改善AFLD小鼠肝脏脂肪变性与激发和/或调节肝脏能量代谢有关。
方法：将64只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组（6只）、模型组(10只)、葛花解酒涤脂汤高剂量干预组(12只)、葛花解酒涤脂汤中剂量干预组（12只）、葛花解酒涤脂汤低剂量干预组(12只)及白藜芦醇干预组(12只)。采用美国国立卫生研究院酒精滥用及酒精中毒研究所(NIAAA)的方法制备C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型，经过组织病理学鉴定模型制备成功后，分别按相应组别灌胃给予葛花解酒涤脂汤高、中、低剂量(4.90，2.45，1.23g·kg-1·d-1)及白藜芦醇（0.4g·kg-1·d-1），连续灌胃9天后处死小鼠，收集肝组织样本。行组织病理学H&E及油红O染色镜检观察肝组织脂肪变性、肝细胞脂肪沉积情况;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定肝组织三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量，计算AMP/ATP、总腺苷酸池(TAN)及能荷(EC);采用分光光度法检测肝组织Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶、SDH活性及微量法检测肝糖原含量;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫组织化学方法分别检测肝组织SIRT1、AMPKα2、ACC、PGC-1αmRNA表达水平及SIRT1、AMPK蛋白表达水平。
结果：葛花解酒涤脂汤高剂量干预组、中剂量干预组及白藜芦醇干预组小鼠肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润及肝细胞脂肪沉积较模型组显著减轻，但葛花解酒涤脂汤低剂量干预组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润及肝细胞脂肪沉积较模型组未见明显改善;RP-HPLC检测发现，AFLD小鼠肝组织EC水平较正常对照组显著降低（P＜0.05），葛花解酒涤脂汤中剂量干预组及白藜芦醇干预组EC水平较正常组显著升高（P＜0.05），葛花解酒涤脂汤高剂量干预组EC水平与正常对照组相似(P＞0.05);AFLD模型组小鼠肝组织AMP/ATP水平较正常组显著升高(P＜0.05)，且AFLD小鼠肝组织AMP/ATP水平显著高于各实验组(P＜0.01);葛花解酒涤脂汤高、中剂量干预组及白藜芦醇干预组AMP/ATP水平较模型组显著下降(P＜0.05)。各实验组小鼠肝组织Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶、SDH活性及肝糖原含量检测结果显示，模型组、葛花解酒涤脂汤中剂量干预组及白藜芦醇干预组均具有同正常组相似的Na+K+-ATP酶活性(P＞0.05);葛花解酒涤脂汤高剂量干预组Na+K+-ATP酶活性显著低于正常对照组、模型组及白藜芦醇二干二预组(P＜0.05)，与葛花解酒涤脂汤中剂量二干二预组相似（P＞0.05）。AFLD小鼠肝组织Ca2+Mg2+-ATP酶活性、SDH活性显著低于正常对照组小鼠(P＜0.05);与模型组比较，葛花解酒涤脂汤干预组能够轻度增加Ca2+Mg2+-ATP酶活性，但差异无统计学意义(P＞0.05)。葛花解酒涤脂汤干预组能够显著增加SDH活性(P＜0.05)。AFLD模型组及各干预组糖原含量较正常对照组显著增加(P＜0.05)，但糖原含量在AFLD模型组及各干预组小鼠肝组织内无差异性（P＞0.05）。本文qRT-PCR检测结果显示，葛花解酒涤脂汤高剂量干预组具有比正常对照组显著增加AMPKα2mRNA表达水平（P＜0.01），葛花解酒涤脂汤中剂量干预组、白藜芦醇干预组具有同正常对照组相似的AMPKα2mRNA表达水平(P＞0.05)，AFLD小鼠肝组织AMPKα2mRNA表达水平显著低于正常组及干预组(P＜0.05);白藜芦醇干预能显著增加小鼠肝组织SIRT1mRNA表达水平(P＜0.01)，葛花解酒涤脂汤高、中剂量干预组具有同正常对照组相似的SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平(P＞0.05)，AFLD小鼠肝组织SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平显著低于各实验组（P＜0.05）;各实验组小鼠肝组织ACC mRNA表达水平相似（P＞0.05）。与qRT-PCR检测结果一致，IHC检测也提示模型组小鼠肝组织内SIRT1、AMPK蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P＜0.05)，葛花解酒涤脂汤高、中剂量及白藜芦醇干预能够显著增加小鼠肝组织细胞质、细胞核SIRT1、AMPK蛋白表达水平(P＜0.05)。
结论：1、再次验证了葛花解酒涤脂汤能够有效改善AFLD小鼠肝脏脂肪变性;
2、葛花解酒涤脂汤干预能够上调AFLD小鼠肝组织EC值及降低AMP/ATP值，增加SDH及降低Na+K+-ATP酶活性，上调肝组织SIRT1、PGC-1α、AMPKα2mRNA及蛋白表达水平;
3、AFLD小鼠肝脏能量代谢减弱，葛花解酒涤脂汤干预能够有效改善AFLD小鼠肝脏脂肪变性与激发和/或调节肝脏能量代谢有关。