第一部分 EMB基因在神经节细胞减少症患儿肠组织中的表达目的:探究EMB基因在神经节细胞减少症患儿病变肠段中的表达情况。方法:收集临床上病理诊断为神经节细胞减少症的患儿结肠组织标本、非先天性巨结肠及其同源病患儿的结肠组织标本,通过免疫组织化学实验检测EMB蛋白在结肠组织的表达情况,通过RT-qPCR和Western Blot实验检测EMB mRNA和蛋白的表达水平。结果:免疫组织化学实验显示,EMB蛋白表达在结肠组织神经丛中。且与对照组相比,神经节细胞减少症患儿结肠组织EMB蛋白染色浅。与对照组相应肠段相比较,神经节细胞减少症患儿病变肠段的EMB mRNA和蛋白表达量均减少。结论:神经节细胞减少症患儿病变肠段组织中EMB基因表达减少。第二部分 Emb基因模型鼠肠神经系统的表型研究目的:构建Emb基因模型小鼠,以探究Emb基因对小鼠肠神经系统发育的影响。方法:通过piggyBac转座系统构建得到Emb基因敲低小鼠,借助Cre/loxP技术,使用Nestin-cre工具鼠得到肠神经系统Emb基因条件性敲除鼠。通过RT-qPCR、Western Blot和免疫组织化学实验对目的基因鼠进行验证。对小鼠的一般情况进行观察统计,包括体重、粪便情况、结肠长度、结肠肌层厚度等。利用Tuj 1抗体对成年小鼠结肠组织石蜡切片进行免疫荧光染色,观察肠神经元的分布情况和数量情况。Tuj1免疫荧光染色观察E12.5d、E14.5d和E16.5d胎鼠肠道中肠神经嵴细胞和肠神经元的数量情况。使用肠胶质细胞标记物SOX10和肠神经元标记物PGP9.5进行结肠肌层Whole Mount免疫荧光染色,统计肌间神经丛内肠胶质细胞与肠神经元数量比例。最后,利用多通道生物信号采集系统测量小鼠的结肠肌电活动,分析慢波的节律、频率和幅度。结果:Emb基因模型鼠结肠组织中Emb mRNA和蛋白表达量低于对照组小鼠。与对照组小鼠相比,体重和结肠肌层厚度无明显差异,而结肠内粪便颗粒增多且干燥,结肠长度较短。在胚胎期和成年期,Emb基因敲低鼠和肠神经系统Emb基因条件性敲除鼠肠神经嵴细胞和肠神经元数量减少,分布稀疏。Emb基因条件性敲除鼠肠胶质细胞与肠神经元数量比值增大。Emb基因模型鼠结肠慢波节律紊乱,频率变慢,幅度变异大。结论:Emb基因在小鼠肠神经系统发育过程中起重要作用。Emb基因表达降低,可引起肠道内粪便潴留,结肠肠神经元数量减少。