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目的:1.观察放疗联合吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1MT)对荷肺癌小鼠的抑瘤效应。2.观察放疗联合1MT治疗对荷瘤小鼠免疫抑制分子IDO的抑制作用。3.探讨放疗联合1MT治疗对荷瘤小鼠抗原提呈细胞树突状细胞(DCs)成熟分化、调节性T细胞分化、CD8+T细胞活化,T细胞耗竭受体(PD-1、TIM3、BTLA)的影响。方法:1.C57BL/C小鼠皮下接种Lewis肺癌(LLC)细胞悬液建立小鼠荷瘤模型后,随机分为4组:对照组(CON组)、1MT组、放疗组(RT组)、联合组(1MT+RT组),分别给予每日两次生理盐水,或1MT 400mg/kg灌胃,RT组和1MT+RT组在接瘤第13天单次给与荷瘤小鼠10Gy x射线照射肿瘤表面,联合组同时给予1MT治疗。每日观察并测量肿瘤大小绘制肿瘤生长曲线;接瘤第28天处死小鼠,剥离肿瘤组织并称重。2.取部分肿瘤组织制备病理切片进行HE染色观察,免疫组织化学染色法观察各组中Ki-67的表达情况。3.RT-qPCR检测各组小鼠肿瘤组织中IDO、PD-1、TIM3、BTLA基因表达水平。4.流式细胞分析仪分别检测各组小鼠脾脏中DCs的成熟表型(MHCII+,CD80+和CD86+)、CD4+CD25+Foxp3+Tregs、CD8+INF-γ+T细胞表达情况。结果:1.肿瘤生长曲线显示:1MT+RT组肿瘤生长最缓慢,接种后的第28天处死小鼠剥离肿瘤组织称重后各组均值为CON组(2.26±0.17)g>RT组(0.84±0.07)g>1MT组(0.49±0.02)g>1MT+RT组(0.24±0.02)g(P<0.05)。与CON组相比,其余三组抑瘤率分别为RT组62.8%<1MT组78.3%<1MT+RT组89.4%(P<0.05)。2.肿瘤组织病理学改变:HE染色肿瘤细胞呈弥漫片状排列,细胞核大小不一、深染、高度异型改变。免疫组化Ki-67检测阳性率:CON组(56.72±4.02)%>RT组(21.24±3.83)%>1MT组(11.32±3.53)%>1MT+RT组(8.31±2.16)%(P<0.05),1MT+RT组分别比CON组、RT组、1MT组降低85.35%、60.88%、26.59%(P<0.05)。3.RT-qPCR检测:肿瘤组织中IDO、PD-1、TIM3、BTLA基因表达水平显示:CON组>RT组>1MT组>1MT+RT组;CON组与1MT组、1MT+RT组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.流式细胞分析显示,脾脏的CD11c+细胞中CD80+表达比例为CON组(56.05±1.79)%RT组(1.32±0.1)%>1MT组(1.02±0.1)%>1MT+RT组(0.64±0.07)%,CON组与其余三组对比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。脾脏中CD8+INF-γ+T细胞比例CON组(54.40±0.49)%
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