幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)是引起慢性活动性胃炎、消化性溃疡的最常见的病原,也是引起胃癌发生的关键因素。抗生素的多联治疗对消除Hp的感染有较好的疗效,然而抗生素治疗在体内仍不能完全有效,而且极易产生抗药性。因此,探讨其它的治疗途径是一种必然的研究趋势。本研究以Hp为材料,采用不同培养基进行培养和保存,并制备成完全抗原对刚开产或开产不久的母鸡进行免疫,用凝集试验法测定其抗体效价,并对免疫接种Hp母鸡免疫应答规律和卵黄抗体的抑菌活性及理化特性等做了初步探讨,这为制备高含量的抗Hp免疫卵黄及相关的生物制剂提供技术依据,也为鸡蛋及免疫蛋的开发利用和深入研究提供借鉴。1幽门螺杆菌的培养与保存本试验采用不同培养基对Hp进行培养和保存,结果表明：固体培养Hp,培养基为哥伦比亚琼脂基础加混合抗生素(10mg·L-1盐酸万古霉素+10mg·L-1两性霉素B+2500iu.L-1多粘菌素B+5mg.L-1甲氧苄胺嘧啶),并分别添加6%脱纤维绵羊血、6%马血清,在5%02,10%C02,85%N2的微需氧条件下,37℃培养3d,均可培养出Hp；严格无菌的条件下,不添加混合抗生素,对细菌的生长没有影响,且不会造成杂菌污染。液体培养Hp,布氏肉汤基础中加入混合抗生素和6%马血清,Hp增菌迅速,但如不及时更换新鲜的微需氧环境,极易形成球形体。菌株采取冷冻保存液法保存于-70℃～-80℃低温条件下6个月,可以成功复苏,且复苏率可达100%。2抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验以Hp全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免,165日龄二免,180日龄三免,于首免后即开始收集鸡蛋,采用凝集试验法测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15d,采取两次加强免疫方法,可有效的引起免疫应答。母鸡在初免45d后,抗体效价最高可达到1：1024,抗体效价大于1：128可维持60d以上,然后抗体效价呈缓慢下降趋势,经130d后,抗体效价下降至1：8。体外抑菌试验表明,高免卵黄抗体具有明显的抑制Hp生长的活性。3鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性对鸡抗幽门螺杆菌高免卵黄抗体的理化特性进行了研究。结果表明：pH值、温度对其活性的影响较明显,胃蛋白酶则加强了这一作用。在pH值单独影响下,pH≤3为其敏感区,如果同时存在胃蛋白酶,则其敏感区为pH≤4,在巴氏消毒温度条件下其具有较好的热稳定性,这对于工业化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。4幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠疾病模型的建立利用蒙古沙土鼠建立Hp NCTC11637株胃内感染模型。感染方法有两种,方法Ⅰ是沙土鼠禁食18h后用50%酒精0.5mL预处理,6h后接种Hp,间隔12h、24h分别再次接种。方法Ⅱ的接种方法同方法Ⅰ,但接种后每日口服雷尼替丁5mg/kg体重。胃内接种Hp后,于第7d、15d、35d、45d分别用Hp抗原酶联免疫诊断试剂盒、细菌培养和胃组织切片的方法观察沙土鼠胃内细菌感染情况和胃病理组织学变化。结果表明,给沙土鼠胃内灌服酒精以损伤胃黏膜并每日口服雷尼替丁,在人工接种35d后,胃内见有多量Hp生长,胃组织病变与Hp自然感染的病例相似。5卵黄抗体对幽门螺杆菌感染沙土鼠的预防试验在成功研制出抗Hp卵黄抗体的基础上,利用蒙古沙土鼠作为实验动物,观察抗Hp卵黄抗体对Hp感染的防制作用。实验鼠随机分为四组(36只／组),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别灌服生理盐水、复合抗生素和抗Hp卵黄抗体,1次/d,连续13d。Ⅳ组皮下注射抗Hp卵黄抗体,1次/d,48h后再注射1次。在首次用药后第48h口服接种幽门螺杆菌(ATCC43504)2.75×108CFU(布氏培养液)。在接种后第7、15、30、45d,Ⅰ组鼠胃内均有大量Hp定植,感染率100%；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的感染率均低于23%。结果表明灌服和注射抗Hp卵黄抗体,可以抑制沙土鼠感染Hp,其抑制效果与抗生素组无明显差异(p<0.05)。6卵黄抗体对沙土鼠胃内感染幽门螺杆菌的治疗试验利用蒙古沙土鼠作为实验动物,观察Hp特异卵黄抗体对胃内Hp感染的治疗效果。实验鼠间隔48h两次口服接种Hp (ATCC43504)布氏培养液1ml(1.15×108CFU),首次接种7d后将实验鼠随机分为四组(16只/组),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别灌服生理盐水、复合抗生素和抗Hp卵黄抗体,1次/d,连续12d;Ⅳ组间隔48h皮下注射抗Hp卵黄抗体两次。在用药前实验鼠胃内均有大量Hp定植,感染率100%；用药后第7d,Ⅱ组鼠的Hp清除率为60%；Ⅲ组、Ⅳ组鼠胃内均有少量Hp存在。用药12d后,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的胃内Hp清除率分别为60%、60%、40%。灌服和注射抗Hp卵黄抗体,可以抑制沙土鼠胃内Hp感染,其抑制效果与抗生素相似。7幽门螺杆菌UreB基因的克隆及原核表达为研制幽门螺杆菌基因工程疫苗或为制备卵黄抗体提供免疫原,以原核载体表达幽门螺杆菌的保护性抗原成分UreB蛋白。PCR方法扩增UreB基因片段,将其克隆至pGEM-T Easy,测序证明UreB基因序列的正确性。酶切后连接至IJpET32a(+)质粒上,转化E.coli BL21(DE3), IPTG诱导后表达UreB融合蛋白,经SDS-PAGE检测表明,融合表达的UreB蛋白分子质量约为80kDa。30℃诱导可使融合蛋白呈可溶性表达,经Ni2+柱亲和层析纯化可得到纯化蛋白。Western blot检测表明融合蛋白可以被Hp免疫小鼠血清的相应抗体识别,具有良好的免疫学活性。