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目的
脑胶质瘤是中枢神经系统最常见且具有高度侵袭性的恶性肿瘤。目前，关于脑胶质瘤微环境中星形胶质细胞对胶质瘤的发生发展进行了较为深入的研究，但关于胶质瘤细胞对星形胶质细胞的影响却鲜见报道。本研究将探讨在低氧条件下脑胶质瘤细胞对共培养的星形胶质细胞活性及功能的影响，并探索其潜在的分子机制。
方法
1.分别收集常氧和低氧（1%O2）条件下的C6细胞和U87细胞条件培养基，作用于不同培养条件下的星形胶质细胞，构建三种不同的实验模型。利用MTT实验来观察三种模型中的星形胶质细胞的活力情况，选择胶质瘤低氧条件培养基作用于在常氧培养条件下的星形胶质细胞的这一实验模型用于后续实验。
2.利用免疫荧光实验（Immunofluorescent，IF）和蛋白免疫印迹技术（WesternBlot）检测星形胶质细胞形态及GFAP表达来反应C6和U87低氧条件培养基对星形胶质细胞的激活情况。
3.通过蛋白免疫印迹技术来检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞的凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。
4.利用AnnexinV-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒来检测C6低氧条件培养基诱导星形胶质细胞的凋亡情况。
5.通过谷氨酸检测试剂盒分别检测C6细胞和U87细胞的低氧条件培养基和常氧条件培养基中的谷氨酸含量，来比较胶质瘤细胞在低氧或常氧条件下的分泌的谷氨酸的差异。
6.利用谷氨酸检测试剂盒检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞的胞外谷氨酸摄取能力的影响。
7.通过蛋白免疫印迹技术来检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞谷氨酸转运体及谷氨酰胺合成酶表达的影响。
8.使用IL-6或IL-8酶联免疫检测试剂盒分别检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞分泌IL-6或IL-8的影响。
9.利用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒和免疫荧光技术来检测C6低氧条件培养基处理1小时后的星形胶质细胞内NF-κBp65蛋白的表达分布变化。
10.用蛋白免疫印迹技术来检测，被C6或U87低氧条件培养基处理1，3，24小时后的星形胶质细胞内STAT3，Akt/mTOR，MAPK通路激活情况。
11.本课题研究应用到的统计分析均由SPSS版软件进行统计分析，P＜0.05表示有统计学意义。
结果
1.C6和U87低氧条件培养基而非常氧条件培养基诱导星形胶质细胞损伤，促使星形胶质细胞发生凋亡。
2.C6和U87低氧条件培养基能够激活星形胶质细胞，但不影响GFAP的表达。
3.低氧促使C6和U87细胞分泌更多的谷氨酸。C6和U87低氧条件培养基能够减弱星形胶质细胞的胞外谷氨酸摄取能力，降低星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的表达，但不影响GLT-1的表达。
4.C6低氧条件培养基处理24h不影响星形胶质细胞IL-6和IL-8的分泌；而U87低氧条件培养基处理24h减弱星形胶质细胞IL-6的分泌。
5.C6低氧条件培养基处理1小时后，星形胶质细胞的细胞浆和细胞核的NF-κB的表达量显著降低。
6.经过C6低氧条件培养基处理1，3，24小时后，星形胶质细胞STAT3（Ser727）磷酸化水平呈现时间依赖性的降低，然而STAT3（Tyr705）磷酸化水平在3小时明显降低且在24小时明显升高。在经过U87低氧条件培养基处理24小时后，星形胶质细胞的STAT3（Ser727）磷酸化水平明显降低，而STAT3（Tyr705）的磷酸化水平在1小时和24小时明显升高。但总STAT3的蛋白表达量保持不变。
7.在经C6低氧条件培养基处理后，星形胶质细胞Akt，mTOR，p38，Erk1/2的磷酸化水平在1小时明显上升但在3小时和24小时逐渐下降。在经U87低氧条件培养基处理1，3，24小时后，星形胶质细胞Akt，mTOR，p38，Erk1/2的磷酸化水平呈时间依赖性的降低。但总的Akt，mTOR，p38，Erk1/2的蛋白表达量并未改变。
结论
1.C6和U87低氧条件培养基能诱导星形胶质细胞的损伤及凋亡。
2.C6和U87低氧条件培养基处理能下调星形胶质细胞GS的表达，同时减弱星形胶质细胞对胞外谷氨酸的摄取能力。
3.C6和U87低氧条件培养基处理改变星形胶质细胞NF-κB，STAT3，Akt/mTOR，MAPK的信号通路。
脑胶质瘤是中枢神经系统最常见且具有高度侵袭性的恶性肿瘤。目前，关于脑胶质瘤微环境中星形胶质细胞对胶质瘤的发生发展进行了较为深入的研究，但关于胶质瘤细胞对星形胶质细胞的影响却鲜见报道。本研究将探讨在低氧条件下脑胶质瘤细胞对共培养的星形胶质细胞活性及功能的影响，并探索其潜在的分子机制。
方法
1.分别收集常氧和低氧（1%O2）条件下的C6细胞和U87细胞条件培养基，作用于不同培养条件下的星形胶质细胞，构建三种不同的实验模型。利用MTT实验来观察三种模型中的星形胶质细胞的活力情况，选择胶质瘤低氧条件培养基作用于在常氧培养条件下的星形胶质细胞的这一实验模型用于后续实验。
2.利用免疫荧光实验（Immunofluorescent，IF）和蛋白免疫印迹技术（WesternBlot）检测星形胶质细胞形态及GFAP表达来反应C6和U87低氧条件培养基对星形胶质细胞的激活情况。
3.通过蛋白免疫印迹技术来检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞的凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。
4.利用AnnexinV-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒来检测C6低氧条件培养基诱导星形胶质细胞的凋亡情况。
5.通过谷氨酸检测试剂盒分别检测C6细胞和U87细胞的低氧条件培养基和常氧条件培养基中的谷氨酸含量，来比较胶质瘤细胞在低氧或常氧条件下的分泌的谷氨酸的差异。
6.利用谷氨酸检测试剂盒检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞的胞外谷氨酸摄取能力的影响。
7.通过蛋白免疫印迹技术来检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞谷氨酸转运体及谷氨酰胺合成酶表达的影响。
8.使用IL-6或IL-8酶联免疫检测试剂盒分别检测C6或U87低氧条件培养基处理对星形胶质细胞分泌IL-6或IL-8的影响。
9.利用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒和免疫荧光技术来检测C6低氧条件培养基处理1小时后的星形胶质细胞内NF-κBp65蛋白的表达分布变化。
10.用蛋白免疫印迹技术来检测，被C6或U87低氧条件培养基处理1，3，24小时后的星形胶质细胞内STAT3，Akt/mTOR，MAPK通路激活情况。
11.本课题研究应用到的统计分析均由SPSS版软件进行统计分析，P＜0.05表示有统计学意义。
结果
1.C6和U87低氧条件培养基而非常氧条件培养基诱导星形胶质细胞损伤，促使星形胶质细胞发生凋亡。
2.C6和U87低氧条件培养基能够激活星形胶质细胞，但不影响GFAP的表达。
3.低氧促使C6和U87细胞分泌更多的谷氨酸。C6和U87低氧条件培养基能够减弱星形胶质细胞的胞外谷氨酸摄取能力，降低星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的表达，但不影响GLT-1的表达。
4.C6低氧条件培养基处理24h不影响星形胶质细胞IL-6和IL-8的分泌；而U87低氧条件培养基处理24h减弱星形胶质细胞IL-6的分泌。
5.C6低氧条件培养基处理1小时后，星形胶质细胞的细胞浆和细胞核的NF-κB的表达量显著降低。
6.经过C6低氧条件培养基处理1，3，24小时后，星形胶质细胞STAT3（Ser727）磷酸化水平呈现时间依赖性的降低，然而STAT3（Tyr705）磷酸化水平在3小时明显降低且在24小时明显升高。在经过U87低氧条件培养基处理24小时后，星形胶质细胞的STAT3（Ser727）磷酸化水平明显降低，而STAT3（Tyr705）的磷酸化水平在1小时和24小时明显升高。但总STAT3的蛋白表达量保持不变。
7.在经C6低氧条件培养基处理后，星形胶质细胞Akt，mTOR，p38，Erk1/2的磷酸化水平在1小时明显上升但在3小时和24小时逐渐下降。在经U87低氧条件培养基处理1，3，24小时后，星形胶质细胞Akt，mTOR，p38，Erk1/2的磷酸化水平呈时间依赖性的降低。但总的Akt，mTOR，p38，Erk1/2的蛋白表达量并未改变。
结论
1.C6和U87低氧条件培养基能诱导星形胶质细胞的损伤及凋亡。
2.C6和U87低氧条件培养基处理能下调星形胶质细胞GS的表达，同时减弱星形胶质细胞对胞外谷氨酸的摄取能力。
3.C6和U87低氧条件培养基处理改变星形胶质细胞NF-κB，STAT3，Akt/mTOR，MAPK的信号通路。