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背景及目的麝香保心丸(Shexiang Baoxin Pill)源自宋代《太平惠民和剂局方》中所记录的苏合香丸,有芳香温通、益气强心之效,是临床治疗冠心病、心绞痛常用的中成药。近年来有研究提示麝香保心丸通过降低血液粘滞度、改善红细胞聚集指数有效改善糖尿病微循环障障碍。糖尿病视网膜病变(diabetes retinopathy,DR)是糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)最为常见的微血管并发症之一,针对性治疗药物有限。本实验主要通过血生化、氧化应激、视网膜神经细胞病变以及视网膜新生血管形成这四个方面观察应用麝香保心丸后对糖尿病大鼠视网膜病变的影响。进一步探索麝香保心丸改善糖尿病视网膜病变的机制,为临床应用祖国传统医学治疗DR提供新的思路和理论依据。方法选取8周龄无特定病原体(specific pathogen free,SPF)雄性SD大鼠,随机分成正常组、模型组与治疗组,模型组与治疗组的大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),建造DM大鼠的模型,治疗组造模成功后给予麝香保心丸35mg/kg/d灌胃,正常组与模型组的大鼠则给予等量的生理盐水灌胃,持续12周。分别以第2、4、6、8、12周为观察周期,每个周期各组随机选取5只大鼠,摘取双侧眼球并制作视网膜的组织切片,于400×显微镜下观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的形态和数量的改变。应用免疫组织化学染色技术观察大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的情况,并应用Image-Pro Plus 6.0半定量检测其面密度(areal density)。试剂盒检测血糖(glucose,GLU)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,TAC)。本实验的数据应用SPSS24.0软件来进行统计学分析,实验数据中的计量资料用均数±标准差(±s)表示,以P<0.05表示具有统计学差异。数据服从正态分布且方差齐,同组不同时期的数据应用单因素方差分析(One-way ANOVA)的统计学方法,对于同期不同组的实验数据应用独立样本t检验。结果1.生化指标检测结果(1)血糖检测模型组与治疗组大鼠血浆中GLU较正常组明显升高(P<0.01),治疗组与模型组之间无统计学差异。(2)血脂检测模型组大鼠血浆中TC、TG及LDL-C指标较正常饲养组升高(P<0.05),治疗组大鼠TC、TG及LDL-C指标较模型组降低(P<0.05)。2.氧化应激相关指标检测结果(1)氧化应激指标模型组与治疗组大鼠血清中MDA水平较正常饲养组有所升高(P<0.05),治疗组大鼠血清中MDA较模型组下降(P<0.05)。(2)抗氧化应激指标模型组与治疗组大鼠血清中SOD、TAC水平较正常饲养组有所下降(P<0.05),治疗组大鼠血清中SOD、TAC较模型组升高(P<0.05);3.视网膜神经细胞病变相关检测结果(1)视网膜组织中caspase-3的免疫组化染色和半定量检测正常组caspase-3有极微弱表达,各时期无明显差异;模型组自第2周起可见caspase-3的阳性表达,随观察周期的逐渐延长,阳性表达率逐步升高,(P<0.05);同时期治疗组的caspase-3的阳性表达均明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)RGCs的HE染色及形态改变正常组大鼠RGCs呈单行且有序的排列,胞核清晰,双极细胞以及感光细胞较为整齐且紧密的排列;模型组大鼠视网膜病变的早期可见细胞水肿以及空泡样变性,随病情进展节细胞层排列混乱,胞核稀疏,逐渐出现了细胞坏死的现象,双极细胞以及感光细胞亦有明显减少;治疗组大鼠视网膜病变的形态学变化在各治疗周期均优于模型组。(3)RGCs的数量检测视网膜切片每400×光镜下,正常组RGCs的平均数量在各时期没有明显差异,而模型组和治疗组RGCs的数量随观察周期延长均为下降趋势;模型组和治疗组各个时期的RGCs数量较正常组均明显偏低,具有统计学意义(P<0.01)。4.视网膜新生血管形成相关检测结果视网膜组织中VEGF、VEGFR-2的免疫组化染色和半定量检测正常组VEGF、VEGFR-2有极微弱表达,各时期无明显差异;模型组自第2周起可见VEGF、VEGFR-2的阳性表达,随观察周期的逐渐延长,阳性表达率逐步升高(P<0.05);同时期治疗组的VEGF、VEGFR-2的阳性表达均明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论麝香保心丸降低TC、TG以及LDL-C水平,调节脂代谢紊乱,相应的改善视网膜硬性渗出与黄斑水肿;降低MDA,同时升高SOD以及TAC,改善氧化应激,减少视网膜内细胞凋亡和屏障损伤;下调细胞凋亡通路蛋白caspase-3的表达,减少视网膜RGCs细胞的损伤及凋亡;下调VEGF及其受体VEGFR-2的表达,从而抑制内皮细胞的增殖与迁移,抑制视网膜新生血管的生成。提示麝香保心丸能显著改善糖尿病大鼠视网膜病变。