论文部分内容阅读
目的:应用整体动物试验的方法研究鼻咽癌时辰放疗的潜力,为进一步的研究及临床应用提供实验依据。
方法:1.细胞培养、细胞接种及瘤块接种传代贴壁生长人鼻咽低分化鳞癌CNE—Ⅱ细胞株,经胰酶消化后制作细胞悬液,计数活细胞比率>90%.调整细胞浓度至4×106个细胞/ml.按每只裸鼠0.2ml细胞悬液腋下皮下注射接种;约4周后长出瘤块。待瘤块最长径为1cm~1.2cm时,将裸鼠拉颈处死,剖下瘤块,剖离皮肤及包膜,漂洗血污,去掉坏死组织,切成约3×3×3mm3大小,接种到裸鼠腋下进行传代,如此共传代三次,均顺利长出实体瘤,然后开始试验。
2.裸鼠的喂养及统一光照动物的饲养按SPF级动物标准饲养,所有实验操作均为无菌操作。裸鼠购回后在实验前统一光照条件下饲养3周以上(光照7:00~19:00,黑暗19:00~7:00)。
3.瘤块接种移植用4~6周龄大的雌性裸小鼠进行瘤块接种移植,方法同前接种到裸鼠后腿。约3周后该部位瘤块长大达到实验入组标准。(入组实验的移植瘤裸小鼠的标准:外观、精神、食欲正常,活动良好,移植瘤形态规则,无明显坏死、液化、溃疡,瘤的最长径为10±1mm)。
4.制作裸鼠后腿移植瘤照射笼,用剂量仪进行实测。将剂量仪的电离室放入笼盒的照射区,保证电离室中心与移植瘤中心在同一平面,在电离室上方放入2.5cm厚照射区形状的蜡块,然后进行实测,共测量4×6cm,8×6cm,13×6cm,17×6cm,27×6cm大小的五个照射野,分别测量各个照射野的每分钟剂量率,照射条件用6MVX线,SSD=100cm(到盒盖)。
5.实验照明晚上的操作由红色灯光照明(15W红色灯泡)。
6.分组实验按照随机分配的原则,将52只达标后的裸鼠分组进行实验。本实验分别在四个时辰4AM、10AM、4PM、10PM进行处理,并设立一个空白对照组。放疗选定3个剂量实行单次照射,剂量分别为10Gy、15Gy、20Gy。空白对照组在移植瘤达标后不给予任何治疗。
7.实验观察实验开始前,测量每只裸鼠的体重,瘤块最长径,实验放疗后每周两次称体重,测量瘤块最长径,直到瘤块最长径超过16mm,即停止观察记录该只裸鼠。
8.记录计算数据包括治疗后的有效率(疗效判断标准依据WHO世界卫生组织制定的疗效评价标准)、毒性指标(治疗后20天内的最大体重丢失率)。
9.统计分析结果。
结果:各时辰放疗组之间的最大体重丢失率的差异有统计学意义。4AM放疗组和10PM放疗组的最大体重丢失率分别为8.06±6.38%和7.92±5.08,低于10AM放疗组的14.52±5.76%和4PM放疗组的13.23±4.19%的最大体重丢失率,差异有统计学意义;与空白对照组的最大体重丢失率的差异没有统计学意义。各时辰放疗组之间的治疗有效率的差异没有统计学意义。当合并为两个组比较:光照组(10AM组+4PM组)和黑暗组(10PM组+4AM组),经卡方检验P=0.041,有统计学意义,黑暗组的有效率25%优于光照组的有效率4.2%。
结论:本研究证实了不同时辰对裸鼠移植瘤进行放疗,疗效有差异,黑暗组的疗效优于光照组。值得进行进一步的研究,初步为临床应用提供实验依据。