植物促生菌株的筛选及橙色微杆菌挥发性有机物对植物促生作用机理研究

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随着化肥农药双减政策的实施,微生物菌肥的研究与开发成为当今农业可持续发展的重点。微生物菌肥含有一种或数种有益活体微生物,借助其代谢过程或代谢产物,达到促进植株生长的目的,植物促生优良菌株的筛选是其中的重要环节与基础。产促生挥发性有机物(Volatile organic compounds,VOCs)是菌株促进植物生长的一个重要方式,本实验通过I型平板筛选得到一株产促生VOCs优势菌株GX14001,明确了其分类地位;测定了菌株GX14001-VOCs对本氏烟草(Nicotiana benthamiana L.)的促生活性,并通过转录组测序结合拟南芥突变体的方法探究了其促生机制;进一步采用GC-MS的方法探究了GX14001所产VOCs的主要成分;对GX14001进行了全基因组草图的测定,对该菌株潜在的其他功能进行了初探;探究了初筛得到的可产促生VOCs菌株的其他促生及生防功能,并对优选菌株进行了番茄(Lycopersicon esculentum M.)温室盆栽实验。主要研究结果如下:1.经二分格平板实验初筛得到了71株VOCs优良菌株,其释放的挥发性有机物对本氏烟草的叶片、鲜重、根长及侧根数等不同方面表现出了明显的促生作用。经复筛及综合评价得到一株产促生VOCs的优势菌株GX14001,并进行了VOCs盆栽实验,研究结果表明GX14001所产挥发性有机物可显著促进本氏烟草和上海青(Brassica chinensis L.)的生长。2.明确菌株GX14001的分类属性,通过扫描电镜观察菌株形态、16S r RNA基因序列同源性比对以及生理生化特征分析,GX14001被鉴定为橙色微杆菌(Microbacterium aurantiacum)。3.通过转录组测序和拟南芥激素突变体实验探究GX14001-VOCs促本氏烟草生长的信号途径及作用机理,结果表明,橙色微杆菌GX14001产生的VOCs可能通过生长素(IAA)、水杨酸(SA)、赤霉素(GAs)这三条通路共同对烟草发挥促生作用。4.通过气相色谱-质谱联用的方法(Gas Chromatography-Mass,GC-MS)对菌株所产VOCs成分进行分析,明确GX14001产生的挥发性有机化合物的主要促生成分为十二烷和二十五烷。5.采用高通量测序技术对GX14001进行了全基因组草图的测定,通过基因组信息学分析发现橙色微杆菌GX14001具有潜在的降解对羟基苯甲酸(p-Hydroxybenzoic acid,PHBA)的潜力,并对此功能进行了初步的探究。6.对初筛得到的可产促生VOCs的菌株分别进行了固氮、溶磷、解钾、产IAA促生活性、产铁载体及拮抗植物病原真菌活性的探究,并对得到的活性优良的菌株进行了番茄温室盆栽实验。研究结果表明,高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis、特基拉芽孢杆菌Bacillus tequilensis、弯曲芽孢杆菌Bacillus flexus、副地衣芽孢杆菌Bacillus paralicheniformis、橙色微杆菌Microbacterium aurantiacum可以通过不同的方面促进番茄植株的生长,这5株菌株具有作为农业应用的潜力,综合分析可得,芽孢杆菌为植物促生细菌的优势菌株,具有促生和生防潜力。
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