【摘 要】
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目的:从动物模型入手,从血清学及病理组织学等不同方面上较系统地研究肝纤维化降解的机制,了解中药作用环节,寻找中药抗肝纤维化的实验依据,为临床应用提供有力的实验依据。 方
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目的:从动物模型入手,从血清学及病理组织学等不同方面上较系统地研究肝纤维化降解的机制,了解中药作用环节,寻找中药抗肝纤维化的实验依据,为临床应用提供有力的实验依据。
方法:将清洁级雄性SD大鼠80只,体重体重84-165g。随机分为正常对照组10只和肝纤维造模组70只,大鼠免疫性肝纤维化模型制备按王宝恩等所采用的方法加以改进,给肝纤维化模型组予人血清白蛋白致敏大鼠后,再予尾静脉攻击2m。从肝纤维化模型组大鼠中随机取出8只,经心脏灌注后取肝,迅速投入液氮,之后转入-70°C冰箱保存,观察肝纤维形成情况。造模成功后,再随机分为柔木丹颗粒预防组、柔木丹颗粒治疗组、软肝片对照组、不予任何药物治疗模型组等,共治疗8w。各组大鼠均作停药处理。采用ELISA方法,测定血清TGF-β1、MMP-13水平;采用免疫组织化学SP法检测肝组织TGF-β1、MMP-13、TIMP-1蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白及HE染色、Masson染色观察肝纤维组织增生情况。
结果:柔木丹颗粒能有效降低肝纤维化大鼠血清TGF-β1的水平,血清MMP-13在纤维化大鼠中较正常大鼠显著下降,在柔木丹颗粒治疗组和软肝片治疗组中均较模型组高,但经过统计学分析发现差异不显著,P>0.05。Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白经计算机图像灰度扫描数字转化后,预防组Ⅰ型胶原蛋白平均值为98.2+24.04;Ⅲ型胶原蛋白平均值为88.9+18.28。与模型组对比行t检验,P<0.05有显著性差异;与软肝片组对比行t检验,P<0.05有显著性差异。治疗组Ⅰ型胶原蛋白平均值为184.2+40.2;Ⅲ型胶原蛋白平均值为175+42.2。与模型组对比行t检验,P<0.05有显著性差异;与软肝片组对比,虽Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白数值较其小,但经统计学处理,P>0.05,两组之间无明显差异。软肝片组Ⅰ型胶原蛋白平均值为287.6+26.56;Ⅲ型胶原蛋白平均值为291.6+43.72。与模型组对比行t检验,P<0.05有显著性差异。而TGF-β1表达模型组较之正常组明显增强(P<0.01)。MMP-13表达在造模后较正常对照组低(P<0.01),但在模型各组中表达趋于平稳。TIMP-1蛋白表达模型组与正常对照组比较持续升高(P<0.01)。
结论:在实验性免疫性肝纤维化大鼠,柔木丹颗粒可降低其血清TGF-β1的水平;血清MMP-13在纤维化大鼠中较正常大鼠显著下降,在柔木丹颗粒治疗组和软肝片治疗组中均较模型组高。
应用柔木丹颗粒治疗后的大鼠,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量减少,表达减弱。柔木丹颗粒能有效降低肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的水平。柔木丹颗粒可以抑制TIMPs的表达,使其对MMPs的抑制作用减弱,有利于MMPs对ECM的降解,从而使肝纤维化得以逆转。
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