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第一部分Annexin A7在匹罗卡品癫痫小鼠脑组织中的表达研究目的:癫痫是神经系统常见的慢性疾病。在现有的药物治疗下,仍未得到控制的癫痫病人达到了30%。因此,进一步深入研究和了解癫痫的发病机制十分重要。近年来,神经元细胞内钙离子的异常在癫痫发生和发展中的重要作用越来越受到研究人员的重视。作为膜联蛋白,Annexin A7可以调节细胞内的钙稳态。我们预建立匹罗卡品小鼠癫痫模型,运用蛋白质免疫印迹和免疫荧光标记技术,初步验证Annexin A7在匹罗卡品癫痫模型小鼠脑组织中的表达。研究方法:将30只健康成年雄性C57BL/6小鼠随机地分为实验组和对照组,实验组建立匹罗卡品癫痫小鼠模型,观察两组行为学特点。分别运用蛋白质免疫印迹和免疫荧光标记技术检测Annexin A7在两组小鼠皮质和海马组织中的表达和细胞学定位。结果:1.癫痫组小鼠皮质组织中Annexin A7蛋白的表达要高于空白对照对照组(P<0.05)。2.癫痫组小鼠海马组织中Annexin A7蛋白的表达要高于空白对照组(p<0.05)。3.在癫痫组颞叶皮质和海马中,Annexin A7与神经元标记分子NeuN存在共表达,与神经元树突标记分子MAP2存在临近表达,而与星形胶质细胞标记分子GFAP不存在共表达或者临近表达。结论和意义:1.在匹罗卡品癫痫模型小鼠的皮质和海马中,Annexin A7的表达升高。2.在匹罗卡品癫痫小鼠的皮质和海马中,Annexin A7表达于神经元中,而不表达于星形胶质细胞中。第二部分Annexin A7对无镁脑片模型中海马神经元兴奋性的影响研究目的:研究证明,癫痫活动中神经元的异常放电来自于兴奋性和抑制性递质释放的不平衡。兴奋性突触传递的增强和抑制性突触传递的减弱都有可能使神经元处于过度兴奋状态。因此,我们预检测Annexin A7对神经元的兴奋性的影响。研究方法:我们应用慢病毒对小鼠海马进行立体定位注射,通过荧光共聚焦显微镜采集EGFP荧光以验证慢病毒是否成功注射入海马并转染至神经元,通过蛋白质免疫印迹技术验证慢病毒是否成功干扰了Annexin A7蛋白的表达;随后我们采用小鼠的无镁脑片模型,运用全细胞膜片钳技术对海马CA1区的神经元进行了电生理检测。结果:1.对慢病毒转染效率的检测:在荧光共聚焦显微镜下检测荧光,结果在切片的海马区域发现了EGFP的绿色荧光;另外,蛋白质免疫印迹结果显示LV-ANXA7组小鼠中Annexin A7蛋白的表达明显低于LV-empty组。2.电生理结果显示,LV-ANXA7组小鼠海马CA1区神经元的动作电位的频率明显小于LV-empty组(P<0.05)。3. LV-ANXA7组及LV-empty组的mIPSC幅值和事件间隔时间无明显差异。4.LV-ANXA7组的mEPSC时间间隔时间明显长于LV-empty组,而两组之间的mEPSC幅值无差别。结论和意义:1.在无镁脑片模型中,Annexin A7可以增加海马CA1区神经元的整体兴奋性。2.在无镁脑片模型中,Annexin A7可以增加兴奋性突触的传递,并且这种作用可能是通过突触前机制。而对抑制性突触的传递并无影响。3. Annexin A7可能参与了癫痫的发生和发展。