论文部分内容阅读
[摘要]目的 探讨饮酒与颅内动脉瘤（inlracranial aneurvsm，TA）发病的关系。方法 选取本院接诊的421例未破裂IA（unruptured intracranial aneurvsm，UIA）患者为观察组和425例非IA患者作为对照组。收集研究对象的一般人口学情况、病史、行为因素和体格检查，并采集外周血3ml进行遗传易感性检测。采用孟德尔随机化方法（mendelian random-ization，MR），以乙醇脱氢酶-1B基因（alcohol dehydrogenase-1B，ADHIB）的功能性突变点rs1229984作为工具变量，分析饮酒与UIA的关系。结果 ADH1B（rsl229984）的基因型在不同的年龄、性别、体型、糖尿病史、高血压史、吸烟的人群中的分布差异无统计学意义（P>0.05）；基因型变异与UIA的发生比较差异无统计学意议（P>0.05）；是否饮酒、不同饮酒量人群中基因型的分布差异有统计学意义（P<0.05）。因而rs1229984符合作为工具变量的条件。应用Logistic回归模型分析，结果显示是否饮酒、适量饮酒及过度饮酒与UIA无相关关系（OR=0.95～1.18，P>0.05）；MR法分析结果显示与不饮酒相比，饮酒、适度饮酒、过度饮酒与TA也无相关关系（OR=0.26～4.01，P>0.05）。结论 饮酒与TA的发生之间不存在具有统计学意义的关联。
[关键词]脑动脉瘤；饮酒；乙醇脱氢酶-1B基因；孟德尔随机化
中图分类号：R651.12 文献标识码：A 文章编号：1009-816X（2018）03-0177-134
doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2018.03.002
颅内动脉瘤（Intmcranial aneurysm，TA）为脑动脉血管的球囊性扩张膨胀，其发生破裂后可造成50%患者死亡，同时30%的幸存者留有严重的后遗症。迄今为止，尚无有效的TA破裂预防手段，对TA的治疗也以有创的手术夹闭和栓塞为主，且手术过程伴发风险。因此，了解TA的病因和发病机制是解决TA问题的关键。TA的病因复杂，目前其发病机制尚未完全阐明。吸烟、男性、高血压等多种因素均能增加TA的形成。然而，饮酒与TA发病的关系尚未明确。此外，传统的观察性病因研究时，由于混杂偏倚的困扰无法排除，同时暴露和结局的时间顺序也常被混淆，常常造成研究结果的不一致性并受到质疑。为解决上述问题，Katan提出了孟德尔随机化（Mendelian Randomization，MR）设计。MR将基因作为待研究暴露因素的工具变量（instrumental variable），用基因型和疾病的关联效应模拟暴露因素对疾病的作用，由于等位基因在配子形成时遵循随机分配的孟德尔遗传规律，因此基因与疾病的关联不会被传统流行病学研究中的混杂和反向因果关系所歪曲，进行因果推断时具有独特的优势。因此，本研究采用MR设计分析饮酒与TA的关系，为进一步阐明TA的发病机制提供线索。
1资料与方法
1.1一般资料：选择2015年1月至2016年12月期间，在湘雅医院神经外科和神经内科招募就诊的421例TA未破裂（unnlDtured intracranial aneurvsm，UIA）患者为观察组（共450个颅脑动脉瘤）和425名非TA患者作为对照组。TA患者纳入标准：（1）经CTA或DSA确诊TA的患者；（2）TA尚未破裂；（3）汉族；（4）同意参与本研究。TA患者排除标准：（1）脑动静脉畸形伴IA；（2）梭形或夹层脑动脉瘤；（3）单纯闭塞载瘤动脉的动脉瘤；（4）曾经出现过因TA破裂或不明原因导致的颅内出血；（5）存在沟通困难无法完成问卷者。对照组的纳入标准：（1）经CTA或DSA确诊的非TA患者；（2）颅脑无其他器质性病变；（3）患者同意参与本研究；（4）汉族。对照组排除标准：（1）出现过不明原因的颅内出血；（2）存在严重慢性病或不能配合完成问卷者。
1.2方法：所有研究对象需接受现场问卷调查和体格检查。问卷调查采用自行设计的问卷，内容包括社会人口学情况，如年龄和性别；行為危险因素如吸烟和饮酒；疾病现患和家族史，如高血压和糖尿病现患史和服药情况，TA家族史等。体格检查主要包括身高、体重和血压。
采集研究对象外周血3ml至EDTA抗凝管中，-20℃保存，于48h内使用Qiagen试剂盒提取DNA并进行rs1229984多态性检测，并进行Hardy-Weinberg平衡检验。该位点是位于染色体4q22的乙醇脱氢酶-1B基因（Alcohol Dehvdrogenase-1B，ADH1B）的突变位点，A等位基因的变异能够影响机体的乙醇氧化能力和饮酒行为，因此本研究使用ADH1B（rs1229984）作为饮酒暴露的工具变量，分析饮酒与TA发生的关系。SNP分型采用多聚酶链反应.限制性片段长度多态性（PCR-RELP）法测定：引物为5’-agaaaea-caattteaggaatttgg-gt-3’和5’-actoaccacgtggtcatctgcg-3’；在PCR反应条件为95℃预变性2min，经30个循环，每个循环95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃保温7min；PCR产物经限制性内切酶消化，并通过3%琼脂糖凝胶分离后行DNA测序分析。
饮酒指每周饮酒2次及以上或达到50ml，并持续1年以上者。“适量饮酒”是指每天饮酒男性不超过24克纯酒精（相当于每周168克），女性不超过12克纯酒精（相当于每周84克）。根据公式换算被访对象的每周饮用酒精量（饮用酒精量：饮酒量（毫升）×酒度数×0.8（酒精密度）），将饮酒者划分为适量饮酒与过度饮酒（男性≥168克/周；女性≥84克/周）。吸烟指连续吸烟6个月及以上，每日至少一支。体质量指数（BMI）=体重（kg）/身高（m）2，BMI<18.5kg/m2为低体重，BMI：18.5～23.9kg/m2为正常体重，BMI：24.0～27.9kg/m2为超重，BMI：≥28kg/m2为肥胖。
[关键词]脑动脉瘤；饮酒；乙醇脱氢酶-1B基因；孟德尔随机化
中图分类号：R651.12 文献标识码：A 文章编号：1009-816X（2018）03-0177-134
doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2018.03.002
颅内动脉瘤（Intmcranial aneurysm，TA）为脑动脉血管的球囊性扩张膨胀，其发生破裂后可造成50%患者死亡，同时30%的幸存者留有严重的后遗症。迄今为止，尚无有效的TA破裂预防手段，对TA的治疗也以有创的手术夹闭和栓塞为主，且手术过程伴发风险。因此，了解TA的病因和发病机制是解决TA问题的关键。TA的病因复杂，目前其发病机制尚未完全阐明。吸烟、男性、高血压等多种因素均能增加TA的形成。然而，饮酒与TA发病的关系尚未明确。此外，传统的观察性病因研究时，由于混杂偏倚的困扰无法排除，同时暴露和结局的时间顺序也常被混淆，常常造成研究结果的不一致性并受到质疑。为解决上述问题，Katan提出了孟德尔随机化（Mendelian Randomization，MR）设计。MR将基因作为待研究暴露因素的工具变量（instrumental variable），用基因型和疾病的关联效应模拟暴露因素对疾病的作用，由于等位基因在配子形成时遵循随机分配的孟德尔遗传规律，因此基因与疾病的关联不会被传统流行病学研究中的混杂和反向因果关系所歪曲，进行因果推断时具有独特的优势。因此，本研究采用MR设计分析饮酒与TA的关系，为进一步阐明TA的发病机制提供线索。
1资料与方法
1.1一般资料：选择2015年1月至2016年12月期间，在湘雅医院神经外科和神经内科招募就诊的421例TA未破裂（unnlDtured intracranial aneurvsm，UIA）患者为观察组（共450个颅脑动脉瘤）和425名非TA患者作为对照组。TA患者纳入标准：（1）经CTA或DSA确诊TA的患者；（2）TA尚未破裂；（3）汉族；（4）同意参与本研究。TA患者排除标准：（1）脑动静脉畸形伴IA；（2）梭形或夹层脑动脉瘤；（3）单纯闭塞载瘤动脉的动脉瘤；（4）曾经出现过因TA破裂或不明原因导致的颅内出血；（5）存在沟通困难无法完成问卷者。对照组的纳入标准：（1）经CTA或DSA确诊的非TA患者；（2）颅脑无其他器质性病变；（3）患者同意参与本研究；（4）汉族。对照组排除标准：（1）出现过不明原因的颅内出血；（2）存在严重慢性病或不能配合完成问卷者。
1.2方法：所有研究对象需接受现场问卷调查和体格检查。问卷调查采用自行设计的问卷，内容包括社会人口学情况，如年龄和性别；行為危险因素如吸烟和饮酒；疾病现患和家族史，如高血压和糖尿病现患史和服药情况，TA家族史等。体格检查主要包括身高、体重和血压。
采集研究对象外周血3ml至EDTA抗凝管中，-20℃保存，于48h内使用Qiagen试剂盒提取DNA并进行rs1229984多态性检测，并进行Hardy-Weinberg平衡检验。该位点是位于染色体4q22的乙醇脱氢酶-1B基因（Alcohol Dehvdrogenase-1B，ADH1B）的突变位点，A等位基因的变异能够影响机体的乙醇氧化能力和饮酒行为，因此本研究使用ADH1B（rs1229984）作为饮酒暴露的工具变量，分析饮酒与TA发生的关系。SNP分型采用多聚酶链反应.限制性片段长度多态性（PCR-RELP）法测定：引物为5’-agaaaea-caattteaggaatttgg-gt-3’和5’-actoaccacgtggtcatctgcg-3’；在PCR反应条件为95℃预变性2min，经30个循环，每个循环95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃保温7min；PCR产物经限制性内切酶消化，并通过3%琼脂糖凝胶分离后行DNA测序分析。
饮酒指每周饮酒2次及以上或达到50ml，并持续1年以上者。“适量饮酒”是指每天饮酒男性不超过24克纯酒精（相当于每周168克），女性不超过12克纯酒精（相当于每周84克）。根据公式换算被访对象的每周饮用酒精量（饮用酒精量：饮酒量（毫升）×酒度数×0.8（酒精密度）），将饮酒者划分为适量饮酒与过度饮酒（男性≥168克/周；女性≥84克/周）。吸烟指连续吸烟6个月及以上，每日至少一支。体质量指数（BMI）=体重（kg）/身高（m）2，BMI<18.5kg/m2为低体重，BMI：18.5～23.9kg/m2为正常体重，BMI：24.0～27.9kg/m2为超重，BMI：≥28kg/m2为肥胖。