【摘要】目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体γ（PPARγ）及配体对JEG-3细胞系凋亡的作用。方法：通过Hoechst33258染色和透射电镜观察15-脱氧-前列腺素J2（15d-PGJ2）作用后细胞形态变化，流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果：Hoechst染色及透射电镜观察到典型的凋亡细胞形态，流式细胞仪检测结果显示，细胞经不同浓度15-d-PGJ2处理后凋亡率明显增加，与对照比较，差异显著（P<0.05），且呈剂量依赖性关系。结论：PPARγ激动配体15-d-PGJ2可诱导JEG-3细胞发生细胞凋亡，为今后进一步研究PPARγ及配体在滋养细胞凋亡机制中的作用提供理论依据和实验基础。
　　关键词：配体，细胞，凋亡，作用
　　中图分类号：R71文献标识码：A
　　本研究通过荧光染色及透射电镜观察，流式细胞测定分析（FCM）研究PPARγ及配体15-d-PGJ2诱导JEG-3细胞凋亡的情况，以探讨其对JEG-3细胞系凋亡的作用。
　　1材料与方法
　　1.1实验对象：JEG-3细胞株购自中国医学科学院细胞库。
　　1.2实验所用主要试剂和仪器：15-d-PGJ2购自美国Cayman公司。
　　1.3实验方法
　　（1）细胞培养：JEG-3细胞接种于FD培养液中，取对数生长期细胞进行实验。（2）细胞凋亡的诱导：将细胞分为对照组和实验组，实验组分别加入浓度为0.1μmol/l、1μmol/l和10μmol/l的15-d-PGJ2，作用24h后诱导细胞凋亡。（3）Hoechst染色：将细胞接种在24孔培养板上，加入处理因素后进行染色、观察并摄片。（4）透射电镜检测：处理细胞24h后制备切片，电子染色后观察凋亡细胞并摄片。（5）流式细胞仪测定：处理细胞24h后，加10μlAnnexin-V-FITC和5μlPI混匀避光室温反应15min后上流式细胞仪检测[1]。
　　1.4统计分析文中进行数据统计的实验数据均重复三次，实验数据均以均值±标准差（ ）表示，采用SPSS19.0统计软件进行t检验。
　　2结果
　　2.1Hoechst33258荧光染色观察
　　对照组：荧光染色下见正常细胞核较大，染色质分布均匀，呈弥散微弱均匀荧光，见图1A。
　　15-d-PGJ2处理组：荧光染色下见部分细胞核固缩变小，细胞核呈致密浓染，部分染色质边缘化，或呈碎块状，可见浓染致密颗粒块状荧光，以及明显核形态变化，见图1B。
　　2.2透射电镜观察
　　正常细胞可见胞膜表面有微绒毛，核染色质均匀、松散的分布在细胞核内，如图2A；而经过PPARγ激动配体15-d-PGJ2处理后，部分JEG-3细胞出现凋亡，电镜下观察到凋亡细胞体积缩小，胞膜表面微绒毛消失，核膜断裂，细胞核染色质浓缩，密度增加，聚集成境界分明的块状，见图2B。
　　2.3流式细胞仪检测
　　本实验使用Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪进行检测，能区分正常细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞及坏死细胞。图3中流式细胞图左下象限（LL）表示正常细胞百分率，右下象限（LR）表示早期凋亡细胞，左上（UL）及右上（UR）象限认为是晚期凋亡和坏死细胞。本研究仅对各实验组早期凋亡（LR）的结果进行统计分析。JEG-3细胞经15-d-PGJ2处理24h后，细胞凋亡率明显增加，且随着15-d-PGJ2浓度的增加，细胞凋亡率也逐渐增加，呈剂量依赖关系，见表1。
　　3讨论
　　滋养细胞凋亡对正常和异常妊娠都是非常重要的。PPARγ被配体激活在多种细胞系中促进细胞凋亡的观点越来越受到重视，许多妊娠并发症，比如早产、流产、先兆子痫、过期妊娠以及滋养细胞疾病等都与滋养细胞凋亡异常有关[2]。本研究证实PPARγ被配体激活后参与滋养细胞的凋亡，通过本实验为今后进一步研究PPARγ及配体在滋养细胞凋亡机制中的作用提供理论依据和实验基础[3]。
　　参考文献
　　[1] 贾瑾，周容.胎盘滋养细胞离子通道及其与子痫前期关系的研究进展[J].实用妇产科杂志.2011年07期
　　[2] 李慧艳，谢贤和，侯梅.PPARγ在结直肠癌中的表达及临床意义[J].海南医学.2011年12期
　　[3] 颜建英，姜陵.激活素A和抑制素A在子痫前期和子痫患者中的表达及意义[J].中国妇幼保健，2011年20期
　　作者简介：张莉，1980.1，女，汉，辽宁沈阳人，博士，主治医师，研究方向：妊娠期高血压疾病