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【摘要】目的分离提取广佛手药材中的香豆素类成分，并对其进行液质核磁鉴定。方法采用硅胶柱层析技术队佛手药材浸膏进行洗脱分离，回收溶剂，重结晶得广佛手香豆素化合物，并进行鉴定。结果从广佛手药材醇浸膏中分离得到2种香豆素浸膏。
【关键词】广佛手；香豆素类；分离；鉴定
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.582文章编号：1004-7484（2013）-07-3982-01
佛手又稱佛手柑，佛手香橼，为芸香科柑橘属植物佛手Citrusmedica L.Var.sarcodactylis Swingle的果实。味辛、苦，性温，具有舒肝和胃，行气止痛，祛湿化痰等功效，是中医用药中常用的组方成分，我国分布较广，是一种名贵的药食两用的可栽培中药材，具有一定的经济价值。佛手的药用研究不多，主要集中于提取工艺，指纹图谱，化学成分的研究以多糖、挥发油居多，目前还发现了再佛手中含有香豆素类、黄酮类成分等成分[1-3]。
本实验欲采用硅胶柱层析技术从广佛手药材醇提取浸膏中分离得到香豆素类成分，进行进一步的研究开发。
1实验部分
1.1实验材料广东佛手药材，购自广东广州致信中药饮片有限公司，产地广东肇庆，批号120501，经广东药学院中药学院刘基柱教授鉴定为芸香科柑橘属植物佛手Citrusmedica L.Var.sarcodactylis Swingle 的果实。
1.2实验仪器与试剂ACQUITY UPLC/Q-TOF-MS系统（美国Waters公司），Bruker AVANCEⅢ500MHZ核磁共振仪，乙腈、甲醇均为色谱纯，购自德国Merk公司，甲酸为质谱级，水为屈臣氏蒸馏水，乙酸乙酯，乙醇，石油醚为分析纯购自天津大茂试剂有限公司。
1.3提取称取广佛手生药材500g，水清洗，粉碎，加入70%乙醇，回流提取3次，每次3小时，回流温度80度。提取液合并后减压浓缩后的乙醇提取物。
1.4分离取广佛手乙醇提取物，硅胶1：1拌样上样进行硅胶柱层析分离，用乙酸乙酯：石油醚：5：1进行洗脱[4]，并浓缩回收溶剂，得到广佛手分离样品（A）和（B）。
1.5鉴定方法与结果
1.5.1核磁鉴定取将上述分离得到的广佛手分离样品（A）和（B），用氮气吹干，放入冰箱4度冷藏，重结晶后干燥，进行核磁共振（500MHZ）鉴定，结果见
1.5.2液质鉴定供试品溶液的制备将上述核磁鉴定后的样品（A）盒（B）氮气吹干，甲醇超声溶解结晶，过0.22μm微孔滤膜，即得分析样品。
1.5.3液质鉴定条件ACQUITY UPLC BEH C18（50mm×2.1mm，1.7μm）色谱柱，柱温为30℃，流速为0.2mL·min-1，进样量为5μL；流动相B：色谱乙腈；梯度洗脱程序为：100%甲醇。ESI源正离子模式，Capillary：3000V，Sample cone：30V，Source temp：100℃，Desolvation temp：350℃，cone：60（L/hr），Desolvation：600（L/hr）
1.5.4鉴定结果分析利用ToF-MS对以上分离得到的各色谱峰成分进行正离子模式扫描，得出主要成分的分子离子信息并使用MasslynxTM4.1工作站推算的元素组成，化合物A的[M+H]+峰的m/z217.0511元素组成为C12H7O4，（A）分子量为216.1950。结合广佛手分离样品（A）的核磁数据如下：
1H-NMR（400MHz DMSO）δ：8.16（1H，d，J=9.6Hz，4-H），8.09（1H，d，J=2.34Hz，2’-H），7.99（1H，s，5-H），7.71（1H，s，8-H），7.08（1H，dd，J=2.16，0.96Hz，3'-H），6.42（1H，d，J=9.5Hz，3-H）。
13C-NMR（400MHz DMSO）δ：160.6（C-2），156.2，（C-9），152.0（C-7），148.3（C-2'），145.5（C-4），125.0（C-6），121.1（C-5），115.8（C-10），114.5（C-4），107.2（C-3'），99.7（C-8）。
与文献比对，发现与5-甲氧基补骨脂素，即5-甲氧基补骨内酯的结构数据相符，得出广佛手分离样品（A）是5-甲氧基补骨脂素[2]，同理，广佛手分离样品（B），[M+H]+峰的m/z207.0662，其元素组成为C11H11O4，核磁数据如下：1H-NMR（300MHz DMSO-d6）δ：3.17（3H，S，OCH3），3.82（3H，S，OCH3），6.23（1H，d，J=9.3Hz，H-3），6.78（1H，S，H-5），7.21（1H，S，H-8），7，92（1H，d，J=9.3Hz，H-4）13C-NMR（300MHz CDCl3）δ：50.46（-OCH3），57.86（-OCH3），104.62（C-8），111.43（C-6），112.39（C-10），113.53（C-3），146.30（C-4），147.09（C-5），151.36（C-9），152.99（C-2），162.51（C-7）。得出广佛手分离样品（B）是6，7-二甲氧基香豆素[2]。
参考文献
[1]张爵玉，蒋林，王琴.广佛手的研究现状与进展[J].中国调味品，2008，25（11）：1-4.
[2]尹锋，楼凤昌.佛手化学成分的研究[J].中国药学杂志，2004，24（2）：12-14.
[3]张颖，刘大勇.多产地佛手化学成分比较[J].科技信息（学术研究），2008，21（1）：33-36.
[4]柳江华，姚新生，徐绥绪，等.重齿毛当归中香豆素的进一步分离[J].药学学报，1996，31（1）：63-67.
【关键词】广佛手；香豆素类；分离；鉴定
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.582文章编号：1004-7484（2013）-07-3982-01
佛手又稱佛手柑，佛手香橼，为芸香科柑橘属植物佛手Citrusmedica L.Var.sarcodactylis Swingle的果实。味辛、苦，性温，具有舒肝和胃，行气止痛，祛湿化痰等功效，是中医用药中常用的组方成分，我国分布较广，是一种名贵的药食两用的可栽培中药材，具有一定的经济价值。佛手的药用研究不多，主要集中于提取工艺，指纹图谱，化学成分的研究以多糖、挥发油居多，目前还发现了再佛手中含有香豆素类、黄酮类成分等成分[1-3]。
本实验欲采用硅胶柱层析技术从广佛手药材醇提取浸膏中分离得到香豆素类成分，进行进一步的研究开发。
1实验部分
1.1实验材料广东佛手药材，购自广东广州致信中药饮片有限公司，产地广东肇庆，批号120501，经广东药学院中药学院刘基柱教授鉴定为芸香科柑橘属植物佛手Citrusmedica L.Var.sarcodactylis Swingle 的果实。
1.2实验仪器与试剂ACQUITY UPLC/Q-TOF-MS系统（美国Waters公司），Bruker AVANCEⅢ500MHZ核磁共振仪，乙腈、甲醇均为色谱纯，购自德国Merk公司，甲酸为质谱级，水为屈臣氏蒸馏水，乙酸乙酯，乙醇，石油醚为分析纯购自天津大茂试剂有限公司。
1.3提取称取广佛手生药材500g，水清洗，粉碎，加入70%乙醇，回流提取3次，每次3小时，回流温度80度。提取液合并后减压浓缩后的乙醇提取物。
1.4分离取广佛手乙醇提取物，硅胶1：1拌样上样进行硅胶柱层析分离，用乙酸乙酯：石油醚：5：1进行洗脱[4]，并浓缩回收溶剂，得到广佛手分离样品（A）和（B）。
1.5鉴定方法与结果
1.5.1核磁鉴定取将上述分离得到的广佛手分离样品（A）和（B），用氮气吹干，放入冰箱4度冷藏，重结晶后干燥，进行核磁共振（500MHZ）鉴定，结果见
1.5.2液质鉴定供试品溶液的制备将上述核磁鉴定后的样品（A）盒（B）氮气吹干，甲醇超声溶解结晶，过0.22μm微孔滤膜，即得分析样品。
1.5.3液质鉴定条件ACQUITY UPLC BEH C18（50mm×2.1mm，1.7μm）色谱柱，柱温为30℃，流速为0.2mL·min-1，进样量为5μL；流动相B：色谱乙腈；梯度洗脱程序为：100%甲醇。ESI源正离子模式，Capillary：3000V，Sample cone：30V，Source temp：100℃，Desolvation temp：350℃，cone：60（L/hr），Desolvation：600（L/hr）
1.5.4鉴定结果分析利用ToF-MS对以上分离得到的各色谱峰成分进行正离子模式扫描，得出主要成分的分子离子信息并使用MasslynxTM4.1工作站推算的元素组成，化合物A的[M+H]+峰的m/z217.0511元素组成为C12H7O4，（A）分子量为216.1950。结合广佛手分离样品（A）的核磁数据如下：
1H-NMR（400MHz DMSO）δ：8.16（1H，d，J=9.6Hz，4-H），8.09（1H，d，J=2.34Hz，2’-H），7.99（1H，s，5-H），7.71（1H，s，8-H），7.08（1H，dd，J=2.16，0.96Hz，3'-H），6.42（1H，d，J=9.5Hz，3-H）。
13C-NMR（400MHz DMSO）δ：160.6（C-2），156.2，（C-9），152.0（C-7），148.3（C-2'），145.5（C-4），125.0（C-6），121.1（C-5），115.8（C-10），114.5（C-4），107.2（C-3'），99.7（C-8）。
与文献比对，发现与5-甲氧基补骨脂素，即5-甲氧基补骨内酯的结构数据相符，得出广佛手分离样品（A）是5-甲氧基补骨脂素[2]，同理，广佛手分离样品（B），[M+H]+峰的m/z207.0662，其元素组成为C11H11O4，核磁数据如下：1H-NMR（300MHz DMSO-d6）δ：3.17（3H，S，OCH3），3.82（3H，S，OCH3），6.23（1H，d，J=9.3Hz，H-3），6.78（1H，S，H-5），7.21（1H，S，H-8），7，92（1H，d，J=9.3Hz，H-4）13C-NMR（300MHz CDCl3）δ：50.46（-OCH3），57.86（-OCH3），104.62（C-8），111.43（C-6），112.39（C-10），113.53（C-3），146.30（C-4），147.09（C-5），151.36（C-9），152.99（C-2），162.51（C-7）。得出广佛手分离样品（B）是6，7-二甲氧基香豆素[2]。
参考文献
[1]张爵玉，蒋林，王琴.广佛手的研究现状与进展[J].中国调味品，2008，25（11）：1-4.
[2]尹锋，楼凤昌.佛手化学成分的研究[J].中国药学杂志，2004，24（2）：12-14.
[3]张颖，刘大勇.多产地佛手化学成分比较[J].科技信息（学术研究），2008，21（1）：33-36.
[4]柳江华，姚新生，徐绥绪，等.重齿毛当归中香豆素的进一步分离[J].药学学报，1996，31（1）：63-67.