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摘要： 将七厘散（《中国药典》2010版一部）更改剂型为七厘散凝胶剂，建立七厘散凝胶剂的薄层色谱鉴别方法，为制定其质量控制标准制定依据。 方法：参照 《中国药典》 20110 版一部七厘散项下血竭、红花、儿茶、冰片的薄层色谱鉴别方法，对处方中的主要药味进行定性鉴别。鉴别血竭的展开剂为三氯甲烷-甲醇（19：1）；鉴别红花的展开剂为正丁醇-甲醇-水（6：1：5）；鉴别儿茶的展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15：12：2）；鉴别冰片的展开剂为环己烷 - 丙酮（9：1）。结果：薄层色谱上具有血竭，红花，儿茶，冰片的鉴别特征，且阴性对照无干扰。结论：色谱特征斑点清晰，该方法操作简便，专属性强，重现性好，可作为七厘散凝胶剂质量标准的控制依据之一，证明七厘散凝胶剂研究的方法可行。
关键词：七厘散凝胶；血竭；红花；儿茶；冰片；薄层
七厘散、七厘胶囊都被2010年版《中国药典》所收载，均系由血竭、红花、儿茶、冰片等药材组成的复方制剂，具有化瘀消肿、止痛、止血之功效，临床用于跌扑损伤、血瘀疼痛、外伤出血等病症的治疗。有口服和外用两种传统给药方式，为充分发挥其散瘀、消肿、促进血液循环的作用、减小毒副作用，本实验对七厘散的给药方式进行改革，欲将七厘散制成凝胶剂型，使药物的有效成分通过体外透皮作用达到长期稳定的释放，凝胶剂是国内和国际医药市场近年来最活跃的形式之一[1]，由于凝胶基质可与粘膜能够产生良好的生物相容性，提高生物利用度，增强药物疗效，对药物具有缓释、控释作用，增加病理部位的有效浓度。目前，在中药的新药研制中，处方中多数药味都必须提供薄层层析谱，本实验即是从新药研究的角度出发，参照《中国药典》 2010 版一部七厘散、七厘胶囊项下的规定，采用薄层色谱法对七厘散凝胶剂处方中主要药味进行鉴别，薄层色谱技术是一个最常用的方法，在定性鉴别中成药，是较为具体的和高灵敏度的，并且可比性较强[2]，依据薄层色谱板上斑点的有无、颜色、位置来判定以确定包含在所述原料药的真实性，采用薄层色谱分析与其他色谱分析相比，显著不同的是能够得到高度直观的图像，其结果表明，该方法简单，重现性好，薄层图谱清晰，阴性对照无干扰，可作为七厘散凝胶剂质量标准的控制依据。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
血竭为国产血竭 ，血竭对照药材，红花对照药材，羟基红花黄素对照品，儿茶素对照品，儿茶对照药材，冰片对照品，均购于中国药品生物制品鉴定所，薄层层析硅胶G、硅胶H（青岛海浪），七厘散凝胶剂（自制），实验所用的试剂均为分析纯。
1.2 七厘散凝胶的制备
取七厘散的组方药材血竭、没药、乳香、红花、儿茶、麝香、冰片、等药材，以95%浓度乙醇浸泡2h，采用渗漉法提取，收集渗漉液，回收乙醇得七厘散浸膏，在预实验基础上，选取卡波姆940、丙二醇、甘油用量为影响因素，进行三因素三水平L9（34）的正交实验，以加入凝胶剂的浸膏中血竭的含量，各项物理性质为考察指标，进行全面评价并验证实验，确定凝胶剂浸膏与基质的配比：称取处方卡波姆-940分散于适量的双蒸馏水中，静置48小时，待其完全溶胀后，三乙醇胺调节pH至7并加入15%丙二醇，得到空白凝胶。另外加入乙醇渗漉提取物，搅拌均匀，加水至足量即得褐红色的七厘散凝胶。
1.3薄层色谱鉴别
1.3.1 血竭的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂2g，加入乙醚10ml，加塞密闭振摇20min后，滤过，滤液作为供试品溶液。同时依原来的处方，去掉血竭，同法制备成阴性对照溶液。另取血竭对照药材0.1g，同上述方法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》附录Ⅵ B）试验，分别吸取上述三种溶液各5l，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇 （19：1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%香草醛-硫酸乙醇溶液，在105℃烘箱烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.2 红花的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂3g，加水50ml，80℃水浴温浸1.5小时，放冷， 离心15分钟，将上清液减压浓缩至干，残渣加水10ml使溶解，以水50ml通过大孔吸附树脂柱洗脱，弃去水洗脱液，再用10%乙醇洗脱至无色，合并洗脱液，减压浓縮至干，残渣加无水乙醇2ml溶解，离心15min后，取上清液作为供试品溶液[3-4]。取红花对照药材0.5g，同上述方法制成对照药材溶液。依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉红花，同上述方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，分别吸取上述三种溶液各3l，点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-甲醇-水（6：1：5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.3 儿茶的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂2g，加50%甲醇25ml，超声处理20min后，滤过，滤液蒸干，在残渣中加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取儿茶对照药材0.5 g，同上述法制成对照药材溶液。再取儿茶素对照品，加甲醇制成每1ml含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉儿茶，同上述方法制成阴性对照溶液，照《中国药典》2010版一部儿茶项下薄层色谱法，分别吸取上述溶液各2？l，点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15：12：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，分别在对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.4 冰片的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂5g，加石油醚（30？60℃）20ml，浸渍20min，滤过，并蒸发滤液至2ml，放置在培养皿中，覆盖上坩锅盖，水浴中加热30min，取出坩埚盖，并用无水乙醇溶解坩埚盖上的升华物，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。 依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉冰片，同上述方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述溶液各5？l点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %磷钼酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，日光检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照溶液在相应位置上无斑点。 2 结果
参照《中国药典》2010 版一部七厘散与七厘散胶囊的鉴别实验，对七厘散凝胶剂成品中主要成分血竭、红花、儿茶、冰片进行了薄层色谱鉴别研究，采用阴性对照试验，色谱板上具有血竭、红花、儿茶、冰片的鉴别特征，各检出成分不受处方中其他药物的干扰，方法稳定，斑点清晰，可作为七厘散凝胶剂的有效鉴别方法。
3 讨论
在鉴别实验中，我们首先参考了几种展开剂系统[5-7] 均无法较好展开冰片的特征斑点，致使结果中出现一些拖尾现象，推测原因可能是处方中血竭、儿茶等中药含有极性与冰片相近的挥发油导致，故在展开时先予以饱和展开剂，采用在层析缸内壁上贴上浸湿的展开剂滤纸，有效减少边缘效应，取得较好展开效果。
定性鉴别是保证中成药品在配方和制备原药材产品质量可靠的依据，也是现代中医药学研究的重要组成部分，其中薄层色谱法具有快速、经济、可靠、操作简单、适用范围广而且重现性好等优点。
本实验在以原处方剂型为前提，基于薄层色谱定性鉴别的研究，采用正交试验法，对浸膏的提取工艺和凝胶成型制备工艺的研究以产品的稳定性和成型性等物理指标进行基质的考察，结果表明，血竭、红花、儿茶、冰片薄层鉴别特征与七厘散、七厘胶囊（《中国药典》2010 年版一部）项下的规定一致，色谱斑点清晰，阴性对照无干扰，该方法操作简便，稳定性、重现性良好，专属性强，可作为七厘散凝胶剂质量标准的考察依据。
参考文献：
[1] 赖宝林，王利胜，张升.中药凝胶剂的研究进展【J】.中药新药与临床药学2010，21（3）：211-213；
[2] 刘 玠，初李佳娃，褚利娟等.治糜灵凝胶剂的薄层色谱鉴别研究，现代生物医学进展【J】， 2015，2（15）： 332-335；
[3] 国家药典委员会，中华人民共和国药典【M】. 北京化学工业出版社；
[4] 金 鸣，高子淳，李金荣等.大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A 【J】.中草药，2004，35（1）：25- 28；
[5] 张洁.全蝎散中大黄、冰片的薄层色谱鉴别研究【J】.亚太传统医药，2013，9（1）：30-31；
[6] 张宜凡，李瑾.牛黄解毒片中冰片的化学鉴别及薄层色谱鉴别【J】.中医药导报，2011，17（6）：95-96；
[7] 郝丽静，杨更亮.牛黄清热散的质量控制【J】.时珍国医国药，2006，17（4）：599-600
关键词：七厘散凝胶；血竭；红花；儿茶；冰片；薄层
七厘散、七厘胶囊都被2010年版《中国药典》所收载，均系由血竭、红花、儿茶、冰片等药材组成的复方制剂，具有化瘀消肿、止痛、止血之功效，临床用于跌扑损伤、血瘀疼痛、外伤出血等病症的治疗。有口服和外用两种传统给药方式，为充分发挥其散瘀、消肿、促进血液循环的作用、减小毒副作用，本实验对七厘散的给药方式进行改革，欲将七厘散制成凝胶剂型，使药物的有效成分通过体外透皮作用达到长期稳定的释放，凝胶剂是国内和国际医药市场近年来最活跃的形式之一[1]，由于凝胶基质可与粘膜能够产生良好的生物相容性，提高生物利用度，增强药物疗效，对药物具有缓释、控释作用，增加病理部位的有效浓度。目前，在中药的新药研制中，处方中多数药味都必须提供薄层层析谱，本实验即是从新药研究的角度出发，参照《中国药典》 2010 版一部七厘散、七厘胶囊项下的规定，采用薄层色谱法对七厘散凝胶剂处方中主要药味进行鉴别，薄层色谱技术是一个最常用的方法，在定性鉴别中成药，是较为具体的和高灵敏度的，并且可比性较强[2]，依据薄层色谱板上斑点的有无、颜色、位置来判定以确定包含在所述原料药的真实性，采用薄层色谱分析与其他色谱分析相比，显著不同的是能够得到高度直观的图像，其结果表明，该方法简单，重现性好，薄层图谱清晰，阴性对照无干扰，可作为七厘散凝胶剂质量标准的控制依据。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
血竭为国产血竭 ，血竭对照药材，红花对照药材，羟基红花黄素对照品，儿茶素对照品，儿茶对照药材，冰片对照品，均购于中国药品生物制品鉴定所，薄层层析硅胶G、硅胶H（青岛海浪），七厘散凝胶剂（自制），实验所用的试剂均为分析纯。
1.2 七厘散凝胶的制备
取七厘散的组方药材血竭、没药、乳香、红花、儿茶、麝香、冰片、等药材，以95%浓度乙醇浸泡2h，采用渗漉法提取，收集渗漉液，回收乙醇得七厘散浸膏，在预实验基础上，选取卡波姆940、丙二醇、甘油用量为影响因素，进行三因素三水平L9（34）的正交实验，以加入凝胶剂的浸膏中血竭的含量，各项物理性质为考察指标，进行全面评价并验证实验，确定凝胶剂浸膏与基质的配比：称取处方卡波姆-940分散于适量的双蒸馏水中，静置48小时，待其完全溶胀后，三乙醇胺调节pH至7并加入15%丙二醇，得到空白凝胶。另外加入乙醇渗漉提取物，搅拌均匀，加水至足量即得褐红色的七厘散凝胶。
1.3薄层色谱鉴别
1.3.1 血竭的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂2g，加入乙醚10ml，加塞密闭振摇20min后，滤过，滤液作为供试品溶液。同时依原来的处方，去掉血竭，同法制备成阴性对照溶液。另取血竭对照药材0.1g，同上述方法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》附录Ⅵ B）试验，分别吸取上述三种溶液各5l，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇 （19：1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%香草醛-硫酸乙醇溶液，在105℃烘箱烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.2 红花的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂3g，加水50ml，80℃水浴温浸1.5小时，放冷， 离心15分钟，将上清液减压浓缩至干，残渣加水10ml使溶解，以水50ml通过大孔吸附树脂柱洗脱，弃去水洗脱液，再用10%乙醇洗脱至无色，合并洗脱液，减压浓縮至干，残渣加无水乙醇2ml溶解，离心15min后，取上清液作为供试品溶液[3-4]。取红花对照药材0.5g，同上述方法制成对照药材溶液。依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉红花，同上述方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，分别吸取上述三种溶液各3l，点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-甲醇-水（6：1：5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.3 儿茶的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂2g，加50%甲醇25ml，超声处理20min后，滤过，滤液蒸干，在残渣中加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取儿茶对照药材0.5 g，同上述法制成对照药材溶液。再取儿茶素对照品，加甲醇制成每1ml含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉儿茶，同上述方法制成阴性对照溶液，照《中国药典》2010版一部儿茶项下薄层色谱法，分别吸取上述溶液各2？l，点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15：12：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，分别在对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在相应位置上无斑点。
1.3.4 冰片的薄层鉴别
取七厘散凝胶剂5g，加石油醚（30？60℃）20ml，浸渍20min，滤过，并蒸发滤液至2ml，放置在培养皿中，覆盖上坩锅盖，水浴中加热30min，取出坩埚盖，并用无水乙醇溶解坩埚盖上的升华物，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。 依原处方比例制备七厘散凝胶，去掉冰片，同上述方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述溶液各5？l点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %磷钼酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，日光检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照溶液在相应位置上无斑点。 2 结果
参照《中国药典》2010 版一部七厘散与七厘散胶囊的鉴别实验，对七厘散凝胶剂成品中主要成分血竭、红花、儿茶、冰片进行了薄层色谱鉴别研究，采用阴性对照试验，色谱板上具有血竭、红花、儿茶、冰片的鉴别特征，各检出成分不受处方中其他药物的干扰，方法稳定，斑点清晰，可作为七厘散凝胶剂的有效鉴别方法。
3 讨论
在鉴别实验中，我们首先参考了几种展开剂系统[5-7] 均无法较好展开冰片的特征斑点，致使结果中出现一些拖尾现象，推测原因可能是处方中血竭、儿茶等中药含有极性与冰片相近的挥发油导致，故在展开时先予以饱和展开剂，采用在层析缸内壁上贴上浸湿的展开剂滤纸，有效减少边缘效应，取得较好展开效果。
定性鉴别是保证中成药品在配方和制备原药材产品质量可靠的依据，也是现代中医药学研究的重要组成部分，其中薄层色谱法具有快速、经济、可靠、操作简单、适用范围广而且重现性好等优点。
本实验在以原处方剂型为前提，基于薄层色谱定性鉴别的研究，采用正交试验法，对浸膏的提取工艺和凝胶成型制备工艺的研究以产品的稳定性和成型性等物理指标进行基质的考察，结果表明，血竭、红花、儿茶、冰片薄层鉴别特征与七厘散、七厘胶囊（《中国药典》2010 年版一部）项下的规定一致，色谱斑点清晰，阴性对照无干扰，该方法操作简便，稳定性、重现性良好，专属性强，可作为七厘散凝胶剂质量标准的考察依据。
参考文献：
[1] 赖宝林，王利胜，张升.中药凝胶剂的研究进展【J】.中药新药与临床药学2010，21（3）：211-213；
[2] 刘 玠，初李佳娃，褚利娟等.治糜灵凝胶剂的薄层色谱鉴别研究，现代生物医学进展【J】， 2015，2（15）： 332-335；
[3] 国家药典委员会，中华人民共和国药典【M】. 北京化学工业出版社；
[4] 金 鸣，高子淳，李金荣等.大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A 【J】.中草药，2004，35（1）：25- 28；
[5] 张洁.全蝎散中大黄、冰片的薄层色谱鉴别研究【J】.亚太传统医药，2013，9（1）：30-31；
[6] 张宜凡，李瑾.牛黄解毒片中冰片的化学鉴别及薄层色谱鉴别【J】.中医药导报，2011，17（6）：95-96；
[7] 郝丽静，杨更亮.牛黄清热散的质量控制【J】.时珍国医国药，2006，17（4）：599-600