论文部分内容阅读
摘要：目的 建立高效液相色谱法测定饮料中的食用色素、防腐剂、甜味剂等8种食品添加剂的检测方法。方法 采用高效液相色谱法，以甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）为流动相，以梯度洗脱的方式，一次直接进样，同时测定8种食品添加剂。结果 各物质在1～100ug/ml范围内呈良好的线性关系（r>0.9996），精密度良好，RSD<3%。结论 本方法准确度较高， 其重现性好，操作简便，能在13min 内将8种添加剂完全分离，适用于饮料中食品添加剂的检测。
关键词：高效液相色谱法 食品添加剂
中图分类号：R155 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0043-03
近年来，由于消费者对于食品的安全性日益的关注，食品中的各种添加剂越来越受到人们的重视。目前所使用的添加剂中，绝大多数为化学合成添加剂，它们是通过磺化，消化，卤化偶氮化等一系列化学合成反应所得，有的具有一定毒性、和致癌、致畸形等作用，如果不加以限制使用，将对人体健康产生危害[1]。高效液相色谱具备分离效果好，灵敏度高和重现性好等优点，因此是目前食品添加剂定性，定量分析的首选方法[2]，本實验采用甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)为流动相，将饮料中的食用色素，防腐剂，甜味剂等8种物质一次直接进样，同时完全分离[3]，出峰时间在3.0～13.0分钟内，且无杂峰干扰，获得了比较满意的结果。
1 材料与方法
1.1 仪器
ACS2000高效液相色谱 (porstar-210)，320紫外检测器，数字pH酸度计，超声清洗机。
1.2 试剂
氨水溶液(分析纯氨水:纯水=1:5)，醋酸溶液(分析纯醋酸: 纯水=1:5)。
1.3 标准储备液和标准混合液
标准储备液：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝，均为0.5mg/ml；苯甲酸、山梨酸、糖精钠，均为1.0mg/ml（购自国家标准物质研究中心）。标准混合液：考虑到各组分峰高的差异，取不同浓度标准储备液：柠檬黄1.0ml，苋菜红0.5ml，胭脂红0.5ml，日落黄0.2ml，亮蓝2.0ml，苯甲酸0.25ml，山梨酸0.1ml，糖精钠0.5ml混合均匀后备用。
1.4 色谱条件
C18柱（250×4.6nm），柱温30℃，检测波长230nm，流动相：甲醇—乙酸氨(0.02mol/L)，pH 6.2，流速1.0ml/min，进样量10ul。梯度洗脱程序：甲醇0～4min 20%～45% ，4%～10min 45%～65%，10～12min 65%～20%，保持8分钟，微量进样器定量进样10μl，实验以保留时间定性，外标物法定量。
1.5 样品测定
选择市售饮料美年达（橙味），美年达（葡萄味），山葡萄配制酒。充分混匀后取样20ml，装入100ml烧杯中，超声波除气20min，用1：5氨水调节pH 6.2，后定容至50ml，经0.45μm水相滤膜过滤后进样，进样量为10μl。
2 结果与讨论
2.1 流动相梯度的选择
本文为了使8种物质更好的分离，采用了梯度洗脱方法，流动相中甲醇含量过高，柠檬黄与苋菜红不能分离，含量过低，亮蓝出峰时间又太长，所以逐渐加大甲醇含量使各组分完全分离。
2.2 检测波长选择
此次检测的8种组份由于分子结构不同，特征吸收峰的波长也不同，经测定各自敏感波长在200～260nm之间，但多数基层检测机构大多使用的是单一波长的普通紫外-可见光检测器，另外应快速检验的要求，一次进样同时完成全部测定，所以兼顾8种物质在同一波长下一次检出，本实验用不同波长对标准品测定，折中选取了对各组分都有吸收的一个公用波长，波长在230～235时能得到比较满意的结果，本实验选择230nm为检测波长。
2.3 流动相pH选择
pH值主要决定流动相极性， 当样品的PKa与流动相的pH非常接近时，流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。所以为了更好的将8种组分分离，找出合适的流动相pH值是至关重要的。本实验选择pH值5.0～6.5的流动相对标准品进行测定，发现pH值越小出峰时间越长，而且基线漂移也越大且不利于柱子的保养。pH在6.0左右时8种物质能得到很好的分离，通过反复实验，选择pH值6.2作为本实验的流动相。（见下图）
2.4 检出限和相关参数
为兼顾8种物质在谱图上出峰高度一致，本实验将不同浓度的标准物质配制成混标，经0.45μm水相滤膜过滤后进样。基线噪声0.1%，准确吸取20ml样品，分别定量的加入测定的八种添加剂，制备成加标样品溶液，测定各成分的峰面积，根据回收率公式计算出加标回收率，结果如下。
样品名称 出峰时间（min） 回归方程相关系数检出限(ng)RSD(%) 回收率（%）
柠檬黄3.16 Y=0.096X+0.0240.999717 1.52102.3
苋菜红3.87 Y=0.32X－0.0940.99997 1.02107.6
糖精钠5.33 Y=0.18X+0.0340.99969 0.6897.5
苯甲酸5.95 Y=0.29X+0.19 0.99986 1.1799.2
胭脂红6.99 Y=0.29X+0.13 0.99994 2.8192.1
山梨酸7.52 Y=0.57X+0.15 0.99982 2.2198.6
日落黄8.38 Y=0.40X+0.08 0.99982 1.5390.3
亮蓝 12.66 Y=0.042X－0.0200.9997171.5485.1
2.5 样品测定
本实验分别对市售3种饮品进行检测，美年达橙味汽水：含有柠檬黄0.006g/kg 、胭脂红0.0018 g/kg、日落黄0.01 g/kg、糖精钠0.005g/kg、苯甲酸0.084 g/kg、山梨酸0.0032 g/kg；美年达葡萄味汽水：含有苋菜红0.013 g/kg、胭脂红0.0003 g/kg，糖精钠0.018 g/kg、苯甲酸0.078 g/kg。；山葡萄配制酒：苋菜红0.029 g/kg、糖精钠0.46 g/kg、山梨酸0.27 g/kg。其中山葡萄配制酒中的糖精钠、山梨酸超过国家标准。
3 总结
采用高效液相色谱法直接进样同时测定饮料中的防腐剂、甜味剂、色素的含量，其重现性好，准确度较高，操作简便，快捷，能在13min 内将8种添加剂完全分离，且没有干扰峰出现，省略了繁琐的实验步骤，大大提高了工作效率。
参考文献
[1] 黎源倩,叶蔚云,代兴碧.食品理化检验[M].北京:人民卫生出版社,2006,3.
[2] GB/T5009.食品卫生检验方法,理化部分（一）[S].35-2003,28～29.
[3] 罗志刚,唐昊天,孙伯文.高效液相色谱法同时测定饮料中合成色素、甜味剂和防腐剂[J].实用预防医学杂志,2010,8.
关键词：高效液相色谱法 食品添加剂
中图分类号：R155 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0043-03
近年来，由于消费者对于食品的安全性日益的关注，食品中的各种添加剂越来越受到人们的重视。目前所使用的添加剂中，绝大多数为化学合成添加剂，它们是通过磺化，消化，卤化偶氮化等一系列化学合成反应所得，有的具有一定毒性、和致癌、致畸形等作用，如果不加以限制使用，将对人体健康产生危害[1]。高效液相色谱具备分离效果好，灵敏度高和重现性好等优点，因此是目前食品添加剂定性，定量分析的首选方法[2]，本實验采用甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)为流动相，将饮料中的食用色素，防腐剂，甜味剂等8种物质一次直接进样，同时完全分离[3]，出峰时间在3.0～13.0分钟内，且无杂峰干扰，获得了比较满意的结果。
1 材料与方法
1.1 仪器
ACS2000高效液相色谱 (porstar-210)，320紫外检测器，数字pH酸度计，超声清洗机。
1.2 试剂
氨水溶液(分析纯氨水:纯水=1:5)，醋酸溶液(分析纯醋酸: 纯水=1:5)。
1.3 标准储备液和标准混合液
标准储备液：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝，均为0.5mg/ml；苯甲酸、山梨酸、糖精钠，均为1.0mg/ml（购自国家标准物质研究中心）。标准混合液：考虑到各组分峰高的差异，取不同浓度标准储备液：柠檬黄1.0ml，苋菜红0.5ml，胭脂红0.5ml，日落黄0.2ml，亮蓝2.0ml，苯甲酸0.25ml，山梨酸0.1ml，糖精钠0.5ml混合均匀后备用。
1.4 色谱条件
C18柱（250×4.6nm），柱温30℃，检测波长230nm，流动相：甲醇—乙酸氨(0.02mol/L)，pH 6.2，流速1.0ml/min，进样量10ul。梯度洗脱程序：甲醇0～4min 20%～45% ，4%～10min 45%～65%，10～12min 65%～20%，保持8分钟，微量进样器定量进样10μl，实验以保留时间定性，外标物法定量。
1.5 样品测定
选择市售饮料美年达（橙味），美年达（葡萄味），山葡萄配制酒。充分混匀后取样20ml，装入100ml烧杯中，超声波除气20min，用1：5氨水调节pH 6.2，后定容至50ml，经0.45μm水相滤膜过滤后进样，进样量为10μl。
2 结果与讨论
2.1 流动相梯度的选择
本文为了使8种物质更好的分离，采用了梯度洗脱方法，流动相中甲醇含量过高，柠檬黄与苋菜红不能分离，含量过低，亮蓝出峰时间又太长，所以逐渐加大甲醇含量使各组分完全分离。
2.2 检测波长选择
此次检测的8种组份由于分子结构不同，特征吸收峰的波长也不同，经测定各自敏感波长在200～260nm之间，但多数基层检测机构大多使用的是单一波长的普通紫外-可见光检测器，另外应快速检验的要求，一次进样同时完成全部测定，所以兼顾8种物质在同一波长下一次检出，本实验用不同波长对标准品测定，折中选取了对各组分都有吸收的一个公用波长，波长在230～235时能得到比较满意的结果，本实验选择230nm为检测波长。
2.3 流动相pH选择
pH值主要决定流动相极性， 当样品的PKa与流动相的pH非常接近时，流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。所以为了更好的将8种组分分离，找出合适的流动相pH值是至关重要的。本实验选择pH值5.0～6.5的流动相对标准品进行测定，发现pH值越小出峰时间越长，而且基线漂移也越大且不利于柱子的保养。pH在6.0左右时8种物质能得到很好的分离，通过反复实验，选择pH值6.2作为本实验的流动相。（见下图）
2.4 检出限和相关参数
为兼顾8种物质在谱图上出峰高度一致，本实验将不同浓度的标准物质配制成混标，经0.45μm水相滤膜过滤后进样。基线噪声0.1%，准确吸取20ml样品，分别定量的加入测定的八种添加剂，制备成加标样品溶液，测定各成分的峰面积，根据回收率公式计算出加标回收率，结果如下。
样品名称 出峰时间（min） 回归方程相关系数检出限(ng)RSD(%) 回收率（%）
柠檬黄3.16 Y=0.096X+0.0240.999717 1.52102.3
苋菜红3.87 Y=0.32X－0.0940.99997 1.02107.6
糖精钠5.33 Y=0.18X+0.0340.99969 0.6897.5
苯甲酸5.95 Y=0.29X+0.19 0.99986 1.1799.2
胭脂红6.99 Y=0.29X+0.13 0.99994 2.8192.1
山梨酸7.52 Y=0.57X+0.15 0.99982 2.2198.6
日落黄8.38 Y=0.40X+0.08 0.99982 1.5390.3
亮蓝 12.66 Y=0.042X－0.0200.9997171.5485.1
2.5 样品测定
本实验分别对市售3种饮品进行检测，美年达橙味汽水：含有柠檬黄0.006g/kg 、胭脂红0.0018 g/kg、日落黄0.01 g/kg、糖精钠0.005g/kg、苯甲酸0.084 g/kg、山梨酸0.0032 g/kg；美年达葡萄味汽水：含有苋菜红0.013 g/kg、胭脂红0.0003 g/kg，糖精钠0.018 g/kg、苯甲酸0.078 g/kg。；山葡萄配制酒：苋菜红0.029 g/kg、糖精钠0.46 g/kg、山梨酸0.27 g/kg。其中山葡萄配制酒中的糖精钠、山梨酸超过国家标准。
3 总结
采用高效液相色谱法直接进样同时测定饮料中的防腐剂、甜味剂、色素的含量，其重现性好，准确度较高，操作简便，快捷，能在13min 内将8种添加剂完全分离，且没有干扰峰出现，省略了繁琐的实验步骤，大大提高了工作效率。
参考文献
[1] 黎源倩,叶蔚云,代兴碧.食品理化检验[M].北京:人民卫生出版社,2006,3.
[2] GB/T5009.食品卫生检验方法,理化部分（一）[S].35-2003,28～29.
[3] 罗志刚,唐昊天,孙伯文.高效液相色谱法同时测定饮料中合成色素、甜味剂和防腐剂[J].实用预防医学杂志,2010,8.