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【摘要】 目的 通过建立小鼠哮喘模型，给予地塞米松治疗，检测血浆8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）水平变化，探讨地塞米松对哮喘小鼠的治疗作用。
方法 选用24只昆明种雄性小鼠，随机分为正常对照组、哮喘组和地塞米松治疗组，哮喘组和地塞米松治疗组予鸡卵白蛋白致敏及激发建立哮喘模型，再分别给予生理盐水和地塞米松治疗，检测血浆8-iso-PGF2α水平。结果 哮喘组血浆中8-iso-PGF2α较正常对照组显著升高（P<0.01），经地塞米松治疗后显著下降(P<0.01)，与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 哮喘小鼠机体存在氧化应激状态，地塞米松对哮喘的氧化应激状态具有明显的干预作用。
【关键词】 支气管哮喘；氧化应激；地塞米松；8-异前列腺素F2α
文章编号：1003-1383(2007)02-0124-03中图分
类号：R 365文献标识码：A
支气管哮喘是常见的气道慢性炎症性疾病，实验与临床资料已经证明氧化物质在包括哮喘在内的许多呼吸系统疾病的病理生理过程中起重要作用。越来越多证据表明，在哮喘慢性气道炎症过程中发生气道的氧化应激反应。而一些触发哮喘加重的因素，例如病毒感染、空气污染等，都会诱导氧化物质产生增加，从而加重气道炎症反应［1］。本实验检测了哮喘模型小鼠予地塞米松治疗后血浆8-iso-PGF2α的变化，现将结果及其意义汇报如下。
材料与方法
1.实验对象 24只清洁级昆明种纯白小鼠，体重20±3 g，全部为雄性，购自广东医学院实验动物中心。将实验小鼠随机分为：正常对照组（N，8只）和实验组（16只），实验组小鼠建立哮喘模型，随机分为：哮喘模型对照组（A，8只），地塞米松组（D，8只）。
2.哮喘模型的建立方法 腹腔注射鸡卵白蛋白抗原液0.5 ml（含氢氧化铝凝胶2 mg和卵白蛋白15 μg）致敏，第7天、14天时各重复一次，第21天始以1%卵蛋白雾化吸入来诱发小鼠哮喘发作,每天2次，连续3天，正常对照组给予生理盐水腹腔注射和雾化。
3.给药方法 地塞米松用量参考文献中人的用药剂量，依据体重折算系数（小鼠和人之间为0.11）及体表面积折算系数（小鼠和人之间为387.9）［2］进行换算。地塞米松组每次雾化前分别通过灌胃给予地塞米松，剂量为：2 mg/kg。
4.检测方法 最后一次引喘12—18小时后，清醒动物眼动脉放血，杀死小鼠，全血以EDTA-Na抗凝，3500 rpm低温离心10 min，取上清置于液氮中备做8-iso-PGF2α测定。8-iso-PGF2α的检测采用酶免疫分析法。放血毕行支气管肺泡灌洗5次，每次0.6 ml，合并5次BALF，混匀，灌板，显微镜下进行白细胞计数。
5.实验仪器及试剂 ELX-800酶标仪（美国Bio-Tek公司）；JSC-A多功能超声雾化器（辽宁省鞍山市电子医疗仪器厂）；卵白蛋白（Grade Ⅱ）（美国Sigma公司），卵磷脂（美国Sigma公司），8-iso-PGF2αEIA Kit（美国Cayman公司），地塞米松（美国Sigma公司）。
6.统计学处理 各指标（计量资料）用-±s表示，SPSS11.0统计软件行方差分析，组间比较用LSD（方差齐时）和Tamhane’s T2（方差不齐时），双侧P<0.05为统计检验显著性标准。
结果
哮喘组BALF中白细胞总数较正常对照组显著升高（P<0.01）；经地塞米松治疗后白细胞总数显著下降（与哮喘组比较P<0.01）。哮喘组血浆中8-iso-PGF2α较正常对照组显著升高（P<0.01），经地塞米松治疗后均显著下降（与哮喘组比较P<0.01），几乎可达正常对照组水平（与正常对照组比较P>0.05）。见表1。
讨论
异构前列腺素（Isoprostanes）是近年来发现的一种新型的前列腺素，具有独特的产生途径和生物活性，通过自由基和活性氧簇(ROS)催化花生四烯酸脂质过氧化产生。其中O2-和H2O2是两种最主要的自由基，通过该途径能生成多种Isoprostanes的异构体，其中8-iso-PGF2α（8-Isoprostane）是Isoprostanes最主要的成分，对其研究也最为深入［3］。研究已经证实8-iso-PGF2α能作为机体氧化/抗氧化状态灵敏、可靠及准确的指标，其结构稳定［4］，脂类样本如血浆、组织一经液氮冷冻后就不会发生自身氧化，在-80℃下可以贮存8个月；其水平随着氧化应激的实验状态改变而改变，与疾病严重程度相关［5］。此外，8-iso-PGF2α在呼吸系统产生重要的生物活性，例如能收缩人和豚鼠气道，引起气道阻塞［6］、能加强气道的非特异性高反应性［7］等。
支气管哮喘急性发作时，大量炎症细胞在支气管黏膜上皮聚集，释放多种细胞因子，同时反应性氧化产物(ROS)增多；由补体、白三烯、内毒素、免疫复合物等因子激活白细胞膜上NAPDH氧化酶，启动呼吸爆发，可产生多种氧自由基导致氧化/抗氧化失衡，氧化应激反应对哮喘的发生、发展起了重要作用［1］。Kirschvin等［8］的研究显示8-iso-PGF2α水平和气道炎症细胞的浸润程度相平行，8-iso-PGF2α参与气道的炎症进程。本实验中，用小鼠成功复制了卵蛋白过敏性哮喘模型，检测哮喘模型小鼠给予地塞米松治疗后小鼠血浆中8-iso-PGF2α水平及BALF中WBC计数。结果显示：哮喘组BALF中白细胞总数和血浆中8-iso-PGF2α水平较正常对照组显著升高（P<0.01），表明哮喘模型小鼠气道存在气道炎症和氧化/抗氧化失衡，经糖皮质激素治疗后白细胞总数及8-iso-PGF2α水平显著下降（P<0.01），表明地塞米松抑制哮喘模型小鼠的气道炎症反应、纠正氧化/抗氧化失衡状态，从而对哮喘有治疗作用。
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方法 选用24只昆明种雄性小鼠，随机分为正常对照组、哮喘组和地塞米松治疗组，哮喘组和地塞米松治疗组予鸡卵白蛋白致敏及激发建立哮喘模型，再分别给予生理盐水和地塞米松治疗，检测血浆8-iso-PGF2α水平。结果 哮喘组血浆中8-iso-PGF2α较正常对照组显著升高（P<0.01），经地塞米松治疗后显著下降(P<0.01)，与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 哮喘小鼠机体存在氧化应激状态，地塞米松对哮喘的氧化应激状态具有明显的干预作用。
【关键词】 支气管哮喘；氧化应激；地塞米松；8-异前列腺素F2α
文章编号：1003-1383(2007)02-0124-03中图分
类号：R 365文献标识码：A
支气管哮喘是常见的气道慢性炎症性疾病，实验与临床资料已经证明氧化物质在包括哮喘在内的许多呼吸系统疾病的病理生理过程中起重要作用。越来越多证据表明，在哮喘慢性气道炎症过程中发生气道的氧化应激反应。而一些触发哮喘加重的因素，例如病毒感染、空气污染等，都会诱导氧化物质产生增加，从而加重气道炎症反应［1］。本实验检测了哮喘模型小鼠予地塞米松治疗后血浆8-iso-PGF2α的变化，现将结果及其意义汇报如下。
材料与方法
1.实验对象 24只清洁级昆明种纯白小鼠，体重20±3 g，全部为雄性，购自广东医学院实验动物中心。将实验小鼠随机分为：正常对照组（N，8只）和实验组（16只），实验组小鼠建立哮喘模型，随机分为：哮喘模型对照组（A，8只），地塞米松组（D，8只）。
2.哮喘模型的建立方法 腹腔注射鸡卵白蛋白抗原液0.5 ml（含氢氧化铝凝胶2 mg和卵白蛋白15 μg）致敏，第7天、14天时各重复一次，第21天始以1%卵蛋白雾化吸入来诱发小鼠哮喘发作,每天2次，连续3天，正常对照组给予生理盐水腹腔注射和雾化。
3.给药方法 地塞米松用量参考文献中人的用药剂量，依据体重折算系数（小鼠和人之间为0.11）及体表面积折算系数（小鼠和人之间为387.9）［2］进行换算。地塞米松组每次雾化前分别通过灌胃给予地塞米松，剂量为：2 mg/kg。
4.检测方法 最后一次引喘12—18小时后，清醒动物眼动脉放血，杀死小鼠，全血以EDTA-Na抗凝，3500 rpm低温离心10 min，取上清置于液氮中备做8-iso-PGF2α测定。8-iso-PGF2α的检测采用酶免疫分析法。放血毕行支气管肺泡灌洗5次，每次0.6 ml，合并5次BALF，混匀，灌板，显微镜下进行白细胞计数。
5.实验仪器及试剂 ELX-800酶标仪（美国Bio-Tek公司）；JSC-A多功能超声雾化器（辽宁省鞍山市电子医疗仪器厂）；卵白蛋白（Grade Ⅱ）（美国Sigma公司），卵磷脂（美国Sigma公司），8-iso-PGF2αEIA Kit（美国Cayman公司），地塞米松（美国Sigma公司）。
6.统计学处理 各指标（计量资料）用-±s表示，SPSS11.0统计软件行方差分析，组间比较用LSD（方差齐时）和Tamhane’s T2（方差不齐时），双侧P<0.05为统计检验显著性标准。
结果
哮喘组BALF中白细胞总数较正常对照组显著升高（P<0.01）；经地塞米松治疗后白细胞总数显著下降（与哮喘组比较P<0.01）。哮喘组血浆中8-iso-PGF2α较正常对照组显著升高（P<0.01），经地塞米松治疗后均显著下降（与哮喘组比较P<0.01），几乎可达正常对照组水平（与正常对照组比较P>0.05）。见表1。
讨论
异构前列腺素（Isoprostanes）是近年来发现的一种新型的前列腺素，具有独特的产生途径和生物活性，通过自由基和活性氧簇(ROS)催化花生四烯酸脂质过氧化产生。其中O2-和H2O2是两种最主要的自由基，通过该途径能生成多种Isoprostanes的异构体，其中8-iso-PGF2α（8-Isoprostane）是Isoprostanes最主要的成分，对其研究也最为深入［3］。研究已经证实8-iso-PGF2α能作为机体氧化/抗氧化状态灵敏、可靠及准确的指标，其结构稳定［4］，脂类样本如血浆、组织一经液氮冷冻后就不会发生自身氧化，在-80℃下可以贮存8个月；其水平随着氧化应激的实验状态改变而改变，与疾病严重程度相关［5］。此外，8-iso-PGF2α在呼吸系统产生重要的生物活性，例如能收缩人和豚鼠气道，引起气道阻塞［6］、能加强气道的非特异性高反应性［7］等。
支气管哮喘急性发作时，大量炎症细胞在支气管黏膜上皮聚集，释放多种细胞因子，同时反应性氧化产物(ROS)增多；由补体、白三烯、内毒素、免疫复合物等因子激活白细胞膜上NAPDH氧化酶，启动呼吸爆发，可产生多种氧自由基导致氧化/抗氧化失衡，氧化应激反应对哮喘的发生、发展起了重要作用［1］。Kirschvin等［8］的研究显示8-iso-PGF2α水平和气道炎症细胞的浸润程度相平行，8-iso-PGF2α参与气道的炎症进程。本实验中，用小鼠成功复制了卵蛋白过敏性哮喘模型，检测哮喘模型小鼠给予地塞米松治疗后小鼠血浆中8-iso-PGF2α水平及BALF中WBC计数。结果显示：哮喘组BALF中白细胞总数和血浆中8-iso-PGF2α水平较正常对照组显著升高（P<0.01），表明哮喘模型小鼠气道存在气道炎症和氧化/抗氧化失衡，经糖皮质激素治疗后白细胞总数及8-iso-PGF2α水平显著下降（P<0.01），表明地塞米松抑制哮喘模型小鼠的气道炎症反应、纠正氧化/抗氧化失衡状态，从而对哮喘有治疗作用。
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