【摘 要】
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目的:本实验通过锥体束定向注射无水乙醇建立痉挛型脑瘫模型鼠,探究孕酮联合早期干预对痉挛型脑瘫模型鼠的神经行为学及细胞凋亡的影响,以期为临床治疗提供依据。方法:选取清洁级足月新生7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠150只依据随机数字表法分成两组:正常对照组（NS组,n=30）和模型组（T组,n=120）。T组于7日龄左侧锥体束定向注射无水乙醇（1μL/g）,NS组7日龄左侧锥体束定向注射
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目的:本实验通过锥体束定向注射无水乙醇建立痉挛型脑瘫模型鼠,探究孕酮联合早期干预对痉挛型脑瘫模型鼠的神经行为学及细胞凋亡的影响,以期为临床治疗提供依据。方法:选取清洁级足月新生7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠150只依据随机数字表法分成两组:正常对照组（NS组,n=30）和模型组（T组,n=120）。T组于7日龄左侧锥体束定向注射无水乙醇（1μL/g）,NS组7日龄左侧锥体束定向注射等量生理盐水。各组大鼠均在造模24 h后（8日龄）,采用改良李晓捷等人鉴定CP大鼠的标准结合Longa评分法进行痉挛型脑瘫判定,造模成功的T组大鼠随机分成3组:溶剂对照组（T1组）、孕酮治疗组（T2组）和孕酮联合早期干预组（T3组）,每组30只。T2组从8日龄起每日给予颈部皮下注射孕酮溶液（8 mg/kg/d）,连续干预至21日龄;T1组、NS组每日注射等量22.5%羟丙基-β-环糊精溶液（22.5%HBC）;T3组于8日龄至21日龄每日注射孕酮溶液（8 mg/kg/d）并加入早期抚触,并于15日龄起增加丰富环境疗法,干预至21日龄。于8,14,21日龄随机抽取大鼠进行神经行为学检测观察干预前后大鼠神经行为学变化;HE染色动态观测大鼠脑组织内囊区病理学形态变化;Western Blot法动态检测海马区Bcl-2、Bax蛋白表达;TUNEL法动态监测大鼠内囊区神经细胞凋亡情况。结果:1.采用改良李晓捷等人鉴定CP大鼠的标准结合Longa评分法进行痉挛型脑瘫判定,8日龄T组大鼠共判定痉挛型脑瘫模型鼠103只,NS组无痉挛型脑瘫鼠。2.神经行为学检测结果:T2、T3组SD大鼠的悬吊试验、Longa评分法、肌张力、倾斜板试验随日龄的增长逐渐变好（P＜0.05）,且T3组优于T2组（P＜0.05）;NS组均无明显变化（P＞0.05）。3.HE染色:NS组各日龄SD大鼠脑组织神经元排列有序,神经元细胞轮廓清晰、形态完整,未见变性、坏死等病理变化;TI、T2、T3组各日龄SD大鼠脑组织可见明显细胞轮廓模糊,排列紊乱,细胞间隙增大,神经元细胞变性、坏死,神经胶质细胞增生。21日龄优于8、14日龄。4.Western Blot法检测:促凋亡Bax:T组大鼠海马区Bax蛋白表达水平较NS组相比明显增加（P＜0.01）;经孕酮及孕酮联合早期干预治疗后,SD大鼠海马区Bax蛋白表达逐渐减少（P＜0.05）;其中T3组Bax表达减少最为明显,与T1组、T2组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。抑凋亡Bcl-2:造模后,T组大鼠海马区Bcl-2蛋白表达较NS组明显增加（P＜0.01）;经孕酮治疗及孕酮联合早期干预治疗后,大鼠海马区Bcl-2蛋白表达进一步增加,但组内比较无显著性差异（P＞0.05）。5.TUNEL法检测:各组大鼠细胞凋亡率动态检测可见,8日龄T组SD大鼠内囊区Tunel阳性细胞数较NS组明显增加（P＜0.01）;经孕酮治疗、孕酮联合早期干预治疗后,T3组SD大鼠阳性细胞数明显减少（P＜0.05）,NS组组内比较无显著性差异（P＞0.05）。结论:1.颅内锥体束定向注射无水乙醇可以成功制备痉挛型脑瘫模型鼠,并可通过改良李晓捷等CP模型判定标准结合Longa评分法进行SCP模型判定。2.孕酮治疗能够改善SCP模型鼠的神经行为学表现,且孕酮联合早期干预的疗效优于单独的孕酮治疗。3.孕酮治疗可有效提高海马区Bcl-2表达及抑制Bax表达,降低SCP模型鼠内囊区神经细胞凋亡率,且孕酮联合早期干预的疗效优于单独的孕酮治疗。
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