【摘 要】
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目的:探究MicroRNA-652在食管鳞癌(ESCC,Esophageal squamous cell carcinoma)中的表达情况,以及与ESCC生物学行为即增殖、侵袭的相关性,并探究验证其直接作用位点。方法:收集37对接受手术治疗的食管癌患者的食管鳞癌组织及其邻近非肿瘤组织。RT-qPCR检测MicroRNA-652的表达。在体外实验中,RT-qPCR检测MicroRNA-652在人食管
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目的:探究MicroRNA-652在食管鳞癌(ESCC,Esophageal squamous cell carcinoma)中的表达情况,以及与ESCC生物学行为即增殖、侵袭的相关性,并探究验证其直接作用位点。方法:收集37对接受手术治疗的食管癌患者的食管鳞癌组织及其邻近非肿瘤组织。RT-qPCR检测MicroRNA-652的表达。在体外实验中,RT-qPCR检测MicroRNA-652在人食管鳞状细胞癌细胞系Kyse70、Kyse150、TE-1和ECA109相对于正常人食管鳞状上皮细胞系HET-1a的表达。将人工合成的MicroRNA-652 mimics以及MicroRNA-NC转染MicroRNA-652表达相对较低的两株细胞系,收集转染48h的细胞,RT-qPCR检测转染效率。CCK-8 assay检测细胞增值能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。在数据库检索网站检索到MicroRNA-652在食管鳞癌中最有可能直接靶基因为成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1,fibroblast growth factor receptor 1),临床样本中RT-qPCR、Western-Blot分别检测FGFR1相关mRNA、蛋白表达情况。在体外实验中,荧光素酶报告检测FGFR1与MicroRNA-652靶向作用位点,收集转染48h的细胞,RT-qPCR、Western-Blot分别检测FGFR1相关mRNA、蛋白表达情况。过表达FGFR1质粒转染两株细胞系,Western-Blot检测转染效率,观察MicroRNA-652介导的细胞增殖、侵袭能力变化。结果:与邻近非肿瘤组织相比,ESCC组织中的MicroRNA-652表达水平显著降低(P<0.05),FGFR1相关mRNA及蛋白水平降低(P<0.05)。体外实验中,与HET-1A相比,MicroRNA-652在四个ESCC细胞系中表达水平显著降低(P<0.05),且以TE-1、Eca109两株细胞系下降最明显。与空白对照组相比,MicroRNA-652 mimics转染组的增殖及侵袭能力均降低(P<0.05),且FGFR1相关mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);FGFR1过表达可部分消除MicroRNA-652对ESCC细胞增殖和侵袭能力的抑制效应(P<0.05)。结论:在食管鳞癌细胞中,MicroRNA-652呈低表达,MicroRNA-652通过靶向作用于FGFR1抑制食管鳞癌细胞的增殖、侵袭。
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