【摘 要】
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目的：研究肺炎链球菌（Sp）诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。 方法：常规方法培养A549细胞与野生型肺炎链球菌（ Sp）；GFP-LC3真核载体转染A549细胞后感染Sp（MOI=30:1，处理时间1 h，2 h，3 h，4 h），采用荧光显微镜观察自噬点形成，透射电镜观察细胞自噬体，Western blot分析LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62和P-ULK1的表达水平；进一步构建Sp溶血素
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目的：研究肺炎链球菌（Sp）诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。
方法：常规方法培养A549细胞与野生型肺炎链球菌（ Sp）；GFP-LC3真核载体转染A549细胞后感染Sp（MOI=30:1，处理时间1 h，2 h，3 h，4 h），采用荧光显微镜观察自噬点形成，透射电镜观察细胞自噬体，Western blot分析LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62和P-ULK1的表达水平；进一步构建Sp溶血素真核表达载体（RFP-PLY），GFP-LC3或/和RFP-PLY转染/共转染A549细胞，分别采用雷帕霉素（Rapa，1mmol/L 10 h，mTOR抑制剂）与渥曼青霉素（WT，2μmol/L 2 h，自噬抑制剂）处理（1 h，2 h，3 h，4 h），Western blot检测PI3K-Ⅰ/Ⅲ、Akt、mTOR和Beclin-1的表达水平。
结果：与对照组相比， Sp感染A549细胞后，自噬点显著增多（p＜0.05），电镜观察到典型的自噬体结构；Sp感染A549细胞后，LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和P-ULK1表达显著上调（P＜0.05），而P62表达水平变化则相反；用mut-PLY感染A549细胞后，发现它不能诱导LC3点状形成；A549转染RFP-PLY处理后，同样观察到显著的自噬现象；Western blot检测结果显示PI3K-Ⅰ、Akt蛋白和mTOR表达下调（P＜0.05），而PI3K-Ⅲ和Beclin1的表达水平未受影响。
结论：野生型Sp诱导A549细胞自噬可能通过PI3K-Ⅰ/Akt/mTOR信号途径。
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