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烟草是重庆市的重要经济支柱产业。但近年来烟草花叶病毒病和烟蚜Myzus persicae(Sulzer)发生普遍、危害严重,已成为各烟区威胁烟叶生产的主要病虫害,给烟叶生产造成巨大经济损失。本文对比研究了3种寄主及感染TuMV的相应寄主对烟蚜生长发育和繁殖的影响;成功克隆出烟草TuMV、TMV和CMV分离物的CP基因,进行了序列测定和分析。其研究结果为进一步探明植物寄主、烟草花叶病毒和烟蚜的关系,控制烟蚜的发生和烟草花叶病毒病的传播奠定了一定基础;为烟区TuMV、TMV和CMV病毒株系分化研究,病毒外壳蛋白表达,生产高效价的抗血清,建立烟草花叶病毒田间快速检测体系提供了技术支持。本文主要研究结果如下:1 3种寄主及感染TuMV的相应寄主对烟蚜生长发育的影响本文在供试温度25±0.5℃、相对湿度75±5%、光周期L:D=14:10条件下,研究了3种寄主及感染TuMV的相应寄主对烟蚜生长发育和繁殖的影响,结果表明,烟蚜具有一定的寄主适应性,寄主植物对烟蚜生长发育和繁殖存在显著影响。在其他条件相同的情况下,在3种健康寄主中,青菜上的烟蚜若虫历期最短(5.6929d),产仔量(34.4286头)最大,产仔高峰日出现最早,死亡高峰日出现得最晚;运用生命表参数对烟蚜取食这3种寄主后的生长发育、繁殖情况进行综合评价,结果表明烟蚜在3种健康寄主植物上的r_m大小顺序排列为:青菜(0.2681)>甘蓝(0.2572)>烟草(0.2271),说明烟蚜最嗜取食青菜,且在青菜上繁殖力最强,其次为甘蓝,最不嗜取食烟草。3种寄主病株对烟蚜生长发育和繁殖也有一定影响。烟蚜取食烟草病株和甘蓝病株的产仔量分别为21.4143头和21.4727头,显著高于取食青菜病株的产仔量(13.2714头);3种感病寄主按产仔高峰大小排序为:甘蓝病株(4.0455头)>烟草病株(2.7647头)>青菜病株(1.6508头);烟草病株和甘蓝病株上的产仔高峰日皆为第11天,青菜病株为第14天。说明青菜病株上烟蚜繁殖力最弱,而烟草病株和甘蓝病株上烟蚜繁殖力没有显著差异。烟蚜在3种寄主病株上的r_m大小顺序排列为:甘蓝病株(0.2556)>烟草病株(0.2158)>青菜病株(0.1729),结果表明青菜病株对烟蚜影响最大,烟草病株次之,甘蓝病株对烟蚜的影响最小。与取食健康寄主相比,3种寄主病株均导致烟蚜若蚜的存活率和成蚜的繁殖力降低。在3种寄主健株和病株上,Weibull模型c值均大于1,烟蚜存活率曲线都属于Ⅰ型。在健康甘蓝上的c值最大(4.9265),存活率下降最快,烟草病株上的c值最小(2.2708),存活率下降最慢:烟草病株和甘蓝病株上的烟蚜死亡高峰日均比健康寄主上的提前,而青菜病株上的烟蚜死亡高峰日则比健康寄主上的晚;3种寄主病株和健株上烟蚜历期和繁殖力比较的结果显示,甘蓝病株导致烟蚜若虫龄期延长,而使成虫寿命缩短,产仔量减少;在青菜病株上,烟蚜若虫期显著长于在健康植株上的若虫期,在病株上的产仔量则显著降低;与健株相比,在烟草病株上的烟蚜除了1龄若虫历期和成蚜繁殖前期显著缩短外,若虫期、成虫寿命和产仔量都没有显著差异。以上结果表明,烟蚜虽然最嗜取食青菜,且在青菜上繁殖力最强,青菜有利于烟蚜生长发育和繁殖,但感染TuMV的青菜病株对烟蚜种群的影响也最大。与健株相比,烟草病株对烟蚜生长发育和繁殖没有显著影响。2武隆烟区TuMV、TMV和CMV外壳蛋白基因克隆及序列分析本研究从少量的病叶中提取到高质量的总RNA,利用RT-PCR分别扩增出重庆武隆烟区TuMV、TMV和CMV分离物的CP基因,并成功克隆了这3种病毒的CP基因,完成了序列测定,进行了同源性分析和系统发育树构建。这为烟区TuMV、TMV和CMV病毒株系分化研究和建立烟草花叶病毒田间快速检测体系提供了技术支持。同源性比较结果表明,本实验克隆的TuMV CP基因与GenBank上部分TuMV CP基因序列核苷酸同源性在86.1%~99.6%之间,氨基酸同源性在92.3%~99.0%之问。与TuMV-CO同源性最高的是AY090660(Tu7),核苷酸同源性为99.6%,氨基酸同源性为99.0%。同源性比较和系统发生树表明,这些病毒分离物可分为4组,而重庆分离物与world-B组分离物同源性较高,由此可以确定TuMV重庆分离物属于Brassica(B)致病型中的world-B组。将本实验分离的TMV分离物与已知的TMV序列进行比较,核苷酸同源性在71.9%~99.8%之间,氨基酸同源性在78.5%~100.0%之间。其中与本实验分离的TMV分离物同源性最高的为Yunnan分离物(DQ352813),核苷酸和氨基酸同源性分别高达99.8%和100.0%,表明它们可能为同一株系。经同源性比较,结果显示本实验分离的CMV分离物与已知序列的核苷酸同源性在75.1%~99.5%之间,氨基酸同源性在77.5%~98.6%之间,这些分离物总体可分为两大组,S70105、Z12818、D00463、U22822、AF198103、L15336和AJ131622为组Ⅱ,其余为组Ⅰ。除了D49496,亚组Ⅰ与CMV-CQ的核苷酸和氨基酸序列同源性均在90.0%以上;而与CMV亚组Ⅱ的核苷酸和氨基酸同源性仅在75.1%~76.7%和77.5%~80.2%之间,所以CMV-CQ分离物应该归属于CMV亚组Ⅰ。