【摘 要】
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目的:在体外实验中,探究阿兰内酯对小鼠软骨细胞内稳态和细胞自噬及其相关通路的调节,同时探讨对信号转导和转录激活因子3磷酸化和核易位的影响。在体内实验中,探究阿兰内酯对小鼠骨关节炎模型软骨退变的作用。方法:通过白细胞介素1β构建体外软骨细胞炎症模型。使用蛋白免疫印记检测诱导性一氧化氮合酶,环氧合酶2,二型胶原,金属基质蛋白酶1、3、13和金属肽酶含血小板反应蛋白5,自噬相关基因5,LC3Ⅱ/Ⅰ和P6
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目的:在体外实验中,探究阿兰内酯对小鼠软骨细胞内稳态和细胞自噬及其相关通路的调节,同时探讨对信号转导和转录激活因子3磷酸化和核易位的影响。在体内实验中,探究阿兰内酯对小鼠骨关节炎模型软骨退变的作用。方法:通过白细胞介素1β构建体外软骨细胞炎症模型。使用蛋白免疫印记检测诱导性一氧化氮合酶,环氧合酶2,二型胶原,金属基质蛋白酶1、3、13和金属肽酶含血小板反应蛋白5,自噬相关基因5,LC3Ⅱ/Ⅰ和P62以及信号转导和转录激活因子3,NF-κB,PI3K-AKT-mTOR通路蛋白的表达,同时运用荧光显微镜观察小鼠软骨细胞中相应指标的变化情况并通过番红O染色进一步观察软骨细胞合成代谢的变化水平。此外利用mRFP-GFP-LC3检测细胞自噬流的改变。采用左膝关节内侧半月板失稳手术构建小鼠骨关节炎模型进行体内实验,通过番红固绿染色和免疫组化观察小鼠骨关节炎模型中软骨退变的情况,并对各组软骨退变情况进行OARSI评分。结果:白细胞介素1β刺激小鼠软骨细胞24h后,诱导性一氧化氮合酶,环氧合酶2,金属基质蛋白酶1、3、13,金属肽酶含血小板反应蛋白5及P62蛋白水平升高,二型胶原,自噬相关基因5,LC3Ⅰ/Ⅱ的表达降低。阿兰内酯可以降低白细胞介素1β刺激下炎症因子,分解代谢和P62的蛋白表达水平同时升高LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平,并恢复受损的自噬流。在白细胞介素1β刺激下,小鼠软骨细胞中信号转导和转录激活因子3蛋白磷酸化水平升高,并向细胞核中转移,经阿兰内酯干预后降低。此外阿兰内酯可以抑制NF-κB和PI3K-AKT-mTOR通路的激活。番红固绿染色显示手术组软骨表面粗糙并伴有软骨剥脱及断裂,而治疗组软骨表面损伤较手术组减轻。结论:阿兰内酯在白细胞介素1β刺激的小鼠软骨细胞中起到维持软骨细胞内稳态和调节细胞自噬的作用,同时还可以抑制NF-κB和PI3K-AKT-mTOR通路的激活,这可能与阿兰内酯抑制信号转导和转录激活因子3磷酸化及其核转移相关。阿兰内酯可有效减轻膝关节内侧半月板失稳手术所致的小鼠软骨退变。
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