背景及目的:癌症已成为人类健康最大的威胁,乳腺癌是癌症死亡的第二大因素。YAP是Hippo信号通路中的核心效应因子,在多个肿瘤中高表达,抑制YAP活性的药物已成为肿瘤靶向治疗的一个新的方向。白桦脂酸具有多种药理活性,已有研究显示白桦脂酸可在多种人类肿瘤细胞,包括乳腺癌细胞中发挥抗肿瘤作用。同时,白桦脂酸能够通过干扰多种重要的癌症信号通路,发挥抗肿瘤作用。然而,白桦脂酸抗肿瘤的详细分子机制还有待继续阐明,且白桦脂酸能否通过Hippo-YAP途径抑制乳腺癌细胞生长尚不清楚。本研究以乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231为研究对象,旨在探讨白桦脂酸是否通过影响Hippo通路中的核心成员YAP蛋白发挥其抗乳腺癌作用。方法:MTT、Transwell、克隆形成等技术检测白桦脂酸对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231细胞存活率、迁移、侵袭和克隆形成能力的影响;q RT-PCR技术和Western blot技术检测MCF-7、MDA-MB-231细胞中YAP及下游CTGF、CYR61m RNA水平和蛋白水平;免疫荧光技术检测YAP在细胞核和细胞质中的定位及其荧光强度,Western blot检测细胞核和细胞质中YAP、p-YAP的表达水平;YAP质粒或YAP si RNA转染MCF-7、MDA-MB-231细胞后,MTT、Transwell、Western blot技术检测过表达YAP或敲低YAP是否对白桦脂酸的作用产生影响;免疫共沉淀检测白桦脂酸对YAP与TEAD相互作用的影响,蛋白水解模式分析实验检测白桦脂酸对胰酶存在下YAP与TEAD蛋白水解模式的影响,紫外分光光度计检测白桦脂酸对YAP蛋白紫外吸收的影响,荧光分光光度计检测白桦脂酸对YAP蛋白荧光光谱的影响,并推测药物与蛋白的结合常数和结合位点。结果:MTT和Transwell实验结果显示不同浓度白桦脂酸对MCF-7、MDA-MB-231细胞生长、迁移、侵袭和克隆形成能力均有抑制作用,且抑制效果呈剂量依赖性。q RT-PCR结果表明YAP及下游靶基因CTGF、CYR61的m RNA表达水平降低。Western blot检测相关蛋白的表达水平,结果显示YAP、CTGF、CYR61的蛋白表达水平降低,而p-YAP表达水平升高。此外,免疫荧光实验表明白桦脂酸影响了细胞中YAP的核定位,使细胞核中的YAP荧光强度减弱,细胞质中YAP荧光强度增强。与此相对应的是,Western blot结果显示,白桦脂酸处理后,细胞核中YAP蛋白水平降低,而细胞质中p-YAP水平升高。YAP过表达削弱了白桦脂酸对乳腺癌细胞的抑制作用,同时逆转了白桦脂酸对YAP蛋白水平的影响及细胞迁移的抑制作用,而YAP敲低增强了白桦脂酸对乳腺癌细胞的作用。免疫共沉淀结果显示白桦脂酸影响了YAP与TEAD的结合,蛋白水解模式分析实验表明白桦脂酸使YAP蛋白水解模式发生了改变,表明其可能改变了YAP蛋白的分子构象。进一步的紫外和荧光光谱学测定结果确证了白桦脂酸确实能够与YAP蛋白产生键合作用,增加了YAP的紫外吸收,使YAP荧光猝灭。据此推测白桦脂酸确实能够与YAP蛋白结合,并改变其构象,从而影响了YAP与TEAD的结合。结论:白桦脂酸能够抑制YAP的核转运,促进其磷酸化,并改变YAP蛋白的分子构象,对YAP-TEAD的相互作用产生影响,抑制乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭及克隆形成能力,从而使肿瘤生长受到抑制,产生抗肿瘤的作用。