【摘 要】
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磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate, PI4P)有利于丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)的复制。在HCV侵染细胞中,复制区域的PI4P浓度较高。已知PI4KB (PI
【出 处】
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北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate, PI4P)有利于丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)的复制。在HCV侵染细胞中,复制区域的PI4P浓度较高。已知PI4KB (PI 4-kinases B)是促进PI4P产生的一种重要的激酶,还是促进包括脊髓灰质炎病毒和爱知病毒(Aichi virus, Aiv)在内的一些小核糖核酸病毒复制的重要蛋白。但PI4KB在HCV复制中的作用还存在一些争议。一些研究发现PI4KB是HCV复制所必须的,但是另一些研究的结果则是相反的。这种不一致的结果可能由于他们的研究对象是不同基因型的HCV导致的。一些研究中发现敲降PI4KB后,不同基因型HCV复制展现出不同的被抑制程度。但是导致这种抑制程度不同的机制尚不清楚。为了检验含乙酰辅酶A结合域蛋白3(Acyl-CoA-binding domain-containing protein 3, ACBD3)在HCV复制中的作用,我们在HCV复制系统OR6中敲降ACBD3,发现病毒蛋白的表达水平明显上升,这表明了ACBD3是HCV负调控因子。通过内源免疫共沉淀实验,我们确定NS5A与ACBD3相互作用。接下来GST-Pull Down实验证明了NS5A与ACBD3(116-327aa)结合,并且发现1b型NS5A结合ACBD3能力更强。文献已知PI4KB也与ACBD3的116-327aa结合,我们的实验也验证了NS5A和PI4KB可以竞争性结合ACBD3。进一步研究发现,ACBD3与1b型的NS5A结合能力明显高于其与2a型NS5A的结合能力,表明NS5A能挟持PI4KB/ACBD3复合物的ACBD3形成NS5A/ACBD3复合物,释放出PI4KB,并且1b型HCV侵染的细胞中ACBD3结合较少的PI4KB,更多的自由PI4KB能够产生PI4P。该研究解释了在不同基因型HCV侵染过程中病毒对PI4KB依赖性的差异机制,鉴定了新的抑制HCV侵染的蛋白ACBD3。
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