【摘 要】
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1目的课题组前期研究发现,肉桂低聚原花青素（Oligomeric procyanidins,OPCs）具有免疫抑制作用,在治疗类风湿关节炎等方面具有广阔的应用前景。本论文在建立HPLC质量评价方法的基础上,对肉桂OPCs制备工艺进行优化研究,为其后期进一步开发应用奠定基础。2方法2.1肉桂中OPCs单体化合物的分离与富集分析肉桂指纹图谱,选择富含OPCs的广西百色肉桂药材,使用课题组前期建立的70
【基金项目】
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国家自然科学基金（81773791）； 上海市优秀学术带头人计划（16XD1403500）；
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1目的课题组前期研究发现,肉桂低聚原花青素（Oligomeric procyanidins,OPCs）具有免疫抑制作用,在治疗类风湿关节炎等方面具有广阔的应用前景。本论文在建立HPLC质量评价方法的基础上,对肉桂OPCs制备工艺进行优化研究,为其后期进一步开发应用奠定基础。2方法2.1肉桂中OPCs单体化合物的分离与富集分析肉桂指纹图谱,选择富含OPCs的广西百色肉桂药材,使用课题组前期建立的70%乙醇提取和多种柱层析联合使用的方法提取和分离PB-2、PC-1和CA-2 3种目标单体OPCs成分,并采用MS及TLC、HPLC与对照品比对的方法鉴定结构。2.2肉桂OPCs HPLC质量评价方法的建立采用肉桂药材中普遍存在的主要活性成分PB-2、PC-1和CA-2作为指标成分,建立肉桂中OPCs质量评价的HPLC方法,并进行方法学考察和验证实验。2.3肉桂OPCs提取和纯化工艺的优化研究利用建立的肉桂OPCs HPLC质量评价方法开展提取和纯化工艺优化研究。提取工艺首先使用单因素对提取溶剂、药材粉碎粒度进行考察,再使用正交实验对提取温度、提取时间、料液比、提取次数进行考察。纯化工艺包含溶剂除杂工艺、沉淀处置方法、萃取工艺和大孔树脂纯化工艺四个方面。（1）除杂工艺:通过对石油醚、二氯甲烷、正己烷除杂效果进行考察,筛选出最佳溶剂,并考察萃取次数。（2）沉淀处置方法:通过考察保留和去除沉淀两种情况下OPCs得率和纯度,决定沉淀处置策略。（3）萃取工艺:通过比较乙酸乙酯在不同比例下OPCs的萃取得率,选择最优比例,并对萃取次数进行考察。（4）大孔树脂纯化工艺:通过对医药工业常用于分离原花青素的6种大孔树脂进行筛选,从中选出最适合分离肉桂OPCs的树脂。然后通过单因素实验对工艺关键参数进行条件优化。3结果3.1肉桂中OPCs单体化合物的分离与富集从广西百色肉桂中分离到3个目标产物,分别是PB-2 97.3 mg、PC-1 52.9mg和CA-2 76.4 mg,纯度为98.1%、98.0%、97.8%,供后期质量评价所需。3.2肉桂中OPCs HPLC质量评价方法的建立研究结果表明,3个指标成分在特定区间内均具有良好的线性关系。PB-2:Y=6339.3X-2.301(2.50×10-3～1.00 mg/m L,r=1.000);PC-1:Y=5585.5X+3.8449(5.00×10-3～1.00 mg/m L,r=1.000);CA-2:Y=4722.7X-5.1305(5.00×10-3～1.00mg/m L,r=1.000)。本方法灵敏度高,重复性好,可评价OPCs样品中OPCs的含量。3.3肉桂中OPCs提取和纯化工艺的优化研究最佳提取条件为:药材粉碎为粗粉,30%的乙醇按料液比1∶8,加热40℃搅拌提取3次,每次30 min。本方法可使药材中OPCs得到充分提取（98%）,提取液冷冻干燥所得固体中OPCs含量为3.40%。除杂萃取工艺为:浓缩液不去沉淀,先用二氯甲烷按照体积1∶1的比例除杂3次,再用体积比1∶3比例的乙酸乙酯萃取OPCs 4次。通过除杂和萃取过程OPCs纯度可提高到16.29%。大孔树脂纯化工艺为:HP-20大孔树脂装柱,径高比1∶8;将3.67 BV（98.0 m L）30 mg/m L的样品溶液以2 BV/h的流速上样;先用3 BV水以2 BV/h流速洗脱,再用7 BV 15%的乙醇以2BV/h流速洗脱。纯化后指标成分纯度32.48%,提高了目标产物的含量。4结论本论文在分离肉桂OPCs单体化合物的基础上,建立了肉桂OPCs的HPLC质量评价方法,并首次应用HPLC含量测定方法对肉桂OPCs成分进行了提取和纯化工艺研究。HPLC评价方法具有受其它成分干扰小,含量测定准确,成分及含量明确的特点,实验结果更为可信。通过对大孔树脂筛选发现HP-20更适合富集OPCs。本研究开发的方法可为后期OPCs的药效实验提供质量可控的样品。
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