蛋白折叠液相色谱法(PFLC)近几年来已成为重组蛋白药物纯化必不可少的手段。它能够显著地提高蛋白复性效率,并同时使蛋白得到纯化。本论文先对大肠杆菌(E.coli)表达的重组人肿瘤坏死因子-α(recombined humen Tumour Necrosis Factor,rhTNF-α)进行了摇瓶发酵工艺的研究和优化,得到高表达、高产量的包涵体,然后分别用疏水色谱(HPHIC)和离子交换色谱(HPIEC)对rhTNF-α进行了复性并同时纯化。文章中首先简要介绍了蛋白质复性的意义,对近年来发展起来的蛋白质复性方法进行了系统地综述:介绍了rhTNF-α的发酵、复性和纯化及其功能和临床研究现状;总结了对TNF的复性及分离纯化的研究进展。引用文献91篇。然后我们在摇瓶发酵的基础上,使用单因素法和正交设计法对rhTNF-α在大肠杆菌DH5α/pVB中表达时的培养基、培养温度、诱导时机、诱导维持时间、接种量及培养基组成成分和配比等进行了研究,选择出较好的摇瓶培养条件。结果表明,在最优条件下,rhTNF-α的表达量可达到39.4%。对E.coli表达的rhTNF-α包涵体粗提产物,我们采用高效疏水色谱法(HPHIC)进行了复性与同时纯化,研究了不同提取液种类、不同疏水性固定相、流动相pH值、流动相中添加不同浓度的脲和GSH/GSSG的比例等因素对rhTNF-α复性和纯化的影响。在优化条件下,进一步HPHIC分离纯化,rhTNF-α纯度为90%,质量回收率为38.7%,比活达到2.64×10~7。同时,成功应用弱阴离子交换蛋白折叠液相色谱法将还原变性的rhTNF-α包涵体粗提产物进行了复性并同时纯化,考察了不同流动相pH值、流动相中脲浓度、GSH/GSSG比例等因素对rhTNF-α复性的影响。在最优化条件下,可在30 min中内对rhTNF-α进行复性并同时纯化,经一步色谱分离,其纯度可达95.2%,质量回收率可达77%,比活达到2.18×10~8。