【摘 要】
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目的:观察SLE-ILD模型鼠中Th17/Treg平衡的作用,探讨雷公藤多苷对系统性红斑狼疮肺间质病变的潜在作用机制。方法:1、MRL/Mp J-Faslpr/J基因鼠行气管切开术滴注博来霉素造成系统性红斑狼疮肺间质病变模型小鼠,以MRL/Mp J为背景的小鼠作为空白对照组,将造模成功的MRL/Mp J-Faslpr/J小鼠随机分为模型组,雷公藤多苷组和醋酸泼尼松组,在连续给药21d后进行取材及检
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目的:观察SLE-ILD模型鼠中Th17/Treg平衡的作用,探讨雷公藤多苷对系统性红斑狼疮肺间质病变的潜在作用机制。方法:1、MRL/Mp J-Faslpr/J基因鼠行气管切开术滴注博来霉素造成系统性红斑狼疮肺间质病变模型小鼠,以MRL/Mp J为背景的小鼠作为空白对照组,将造模成功的MRL/Mp J-Faslpr/J小鼠随机分为模型组,雷公藤多苷组和醋酸泼尼松组,在连续给药21d后进行取材及检测相关指标。2、观察各组肺脏、脾脏的外部形态变化,HE染色、Masson染色检测肺组织结构变化及肺间质病变情况。3、ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液IL-17的表达以及血清中IL-17、IL-10的表达。4、Western Blotting法检测肺间质纤维化标志性蛋白α-SMA表达水平。5、Ficoll法分离小鼠脾淋巴细胞,用CD4+IL-17+标记Th17细胞、用CD4+CD25+Foxp3+标记Treg细胞,用流式细胞术检测脾Th17细胞、Treg细胞的表达水平。6、通过RT-PCR法检测小鼠脾Th17细胞关键性转录因子RORγt以及Treg细胞关键性转录因子Foxp3m RNA的表达。7、通过RT-PCR法检测小鼠肺脏IL-6、IL-17、IL-10、α-SMA以及TNF-α、TGF-βm RNA的表达水平。结果:1、滴注博来霉素制备系统性红斑狼疮肺间质病变模型小鼠,滴注博来霉素21d后,模型制备成功。2、取材后观察,SLE-ILD模型组小鼠与空白对照组比较,肺脏表面多处出现淤血点,肺边缘可见白色病变,脾脏变大,表面颗粒感。雷公藤多苷组及激素组与模型组比较,肺脏淤血点减少,肺叶白色点状病变减少,脾脏变小。肺组织病理染色结果显示:空白对照组小鼠肺组织结构正常,可见大气道及血管壁周围正常少许蓝色基质胶原纤维,SLE-ILD模型组小鼠的肺间隔增宽,肺泡结构破坏、大片炎症细胞浸润可见肺泡炎症,肺间质和肺泡间隔可见蓝色胶原沉积以及小灶样蓝色的胶原纤维,弥漫性肺间质胶原增生沉积,伴有肺泡的融合;雷公藤多苷组小鼠肺间隔变厚不明显,轻度炎症,肺泡结构破坏相对完整,胶原纤维沉积程度较模型组减轻。3、ELISA法检测结果显示,与空白对照组比较,模型组BALF中IL-17水平升高,血清中IL-17升高、IL-10降低（P＜0.05）;与模型组比较,雷公藤多苷组BALF中IL-17降低,血清中IL-17降低、IL-10升高（P＜0.05）。4、Western Blotting法结果显示:与空白对照组相比较,SLE-ILD模型组小鼠α-SMA蛋白水升高（P＜0.05）;与模型组相比较,雷公藤多苷组小鼠α-SMA降低（P＜0.05）。5、流式细胞术结果显示:与空白对照组相比较,模型组小鼠Th17细胞增多、Treg细胞降低、Th17/Treg细胞比例升高（P＜0.05）,与模型组相比较,雷公藤多苷组小鼠Th17细胞减少、Treg细胞升高、Th17/Treg细胞比例降低（P＜0.05）。6、RT-PCR检测脾脏RORγt、Foxp3 m RNA结果显示:模型组小鼠与空白对照组相比较,脾脏RORγt m RNA表达量升高、Foxp3 m RNA表达量降低（P＜0.05）,雷公藤多苷组与模型组相比较,小鼠脾脏RORγt m RNA表达量降低、Foxp3 m RNA表达量升高（P＜0.05）。7、RT-PCR检测肺组织IL-6、IL-17、IL-10、α-SMA以及TNF-α、TGF-βm RNA水平的表达结果显示:模型组小鼠肺组织与空白对照组相比较,IL-6 m RNA、IL-17 m RNA、α-SMA m RNA、TNF-αm RNA表达量升高、IL-10 m RNA、TGF-βm RNA表达量降低（P＜0.05）,雷公藤多苷组小鼠与模型组相比较,IL-6 m RNA、IL-17 m RNA、α-SMA m RNA、TNF-αm RNA表达量降低、IL-10 m RNA、TGF-βm RNA表达量升高（P＜0.05）。结论：1、雷公藤多苷能够改善系统性红斑狼疮肺间质病变模型小鼠肺组织病理变化,下调α-SMA蛋白表达,可能通过调节免疫改善小鼠肺间质病变。2、雷公藤多苷可能通过调节Th17/Treg细胞平衡,降低血清及BALF中IL-17表达,提高血清IL-10保护性因子的表达水平,对SLE-ILD起到改善作用。
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