【摘 要】
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胚胎干细胞是从胚胎发育早期的囊胚的内细胞团内分离出来的一类细胞。胚胎干细胞的基本特性是能够自我更新和具有全能性。自我更新是指在特定的培养条件下,胚胎干细胞具有无限增殖的能力。全能性是指其能分化为体内源自三个胚层的所有类型的细胞。它的这些基本特征使其在理论研究以及人类疾病的治疗方面具有多种重要应用。研究表明,在胚胎干细胞表面存在特异的分子,可以作为胚胎干细胞分离、鉴定以及纯化的标志物。然而,目前已经
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胚胎干细胞是从胚胎发育早期的囊胚的内细胞团内分离出来的一类细胞。胚胎干细胞的基本特性是能够自我更新和具有全能性。自我更新是指在特定的培养条件下,胚胎干细胞具有无限增殖的能力。全能性是指其能分化为体内源自三个胚层的所有类型的细胞。它的这些基本特征使其在理论研究以及人类疾病的治疗方面具有多种重要应用。研究表明,在胚胎干细胞表面存在特异的分子,可以作为胚胎干细胞分离、鉴定以及纯化的标志物。然而,目前已经发现标志物不仅数量较少,并且特异性也不高,阻碍了其在胚胎干细胞研究中的应用。因此,筛选并鉴定胚胎干细胞表面新的标志物具有重要意义。噬菌体展示是一种非常有效的基因工程技术手段,其主要用来从包含大量不同个体的文库中筛选具有特意结合能力的多肽或者蛋白质。通过基因工程手段,将外源mRNAs,CDNAs,基因组DNA和合成的寡聚核苷酸序列克隆进噬菌体的基因组中,并使外源多肽或蛋白质与噬菌体衣壳蛋白融合,展示在噬菌体表面。这些表达的多肽,活着蛋白即可作为文库以备筛选。本研究的目的就在于运用噬菌体展示技术筛选并鉴定与小鼠胚胎干细胞R1的表面分子能够特异地结合的多肽,从而为鉴定新的R1表面标志物提供基础。我们首先建立了R1的自我更新及诱导分化的培养体系,并得到了足够数量的R1、分化细胞以及作为滋养层的MEF细胞。然后,我们从噬菌体文库中筛选能够特异结合到R1细胞表面的多肽。在筛选中,R1作为正筛细胞,分化细胞作为负筛细胞。在进行了三轮筛选之后,我们初步得到了能与R1特异地结合的噬菌体,通过对其插入的外源多肽的编码序列进行序列分析,确定了其对应的外源多肽。然后,我们使用分化细胞和MEF细胞作为对照,进行ELLISA验证,并对结果进行统计分析,证明这些多肽能够特意地结合R1。最后我们对得到的多肽进行同源性分析,以此推断该多肽序列可能对应的蛋白质,为推测其可能作用的R1表面分子提供重要线索。
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