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目的:红核妇洁洗液是由单味药材山楂核经干馏等现代工艺制备而得。目前，红核妇洁洗液还存在质量控制薄弱、物质基础不明、抗菌作用机制不清等问题，在一定程度上限制了其在临床的广泛应用。本课题从质量控制、物质基础及抗菌作用机制等方面，对红核妇洁洗液进行质量控制提升及抗霉菌性阴道炎（VCC）作用机制进行研究，以完善红核妇洁洗液质量控制体系，阐明其抗VCC作用机制。
方法:1.采集15批次不同产地来源的山楂核，根据2015年版《中国药典》四部附录相应方法，对包括其性状、杂质、鉴别、浸出物等内容进行检测，完善与提升山楂核的质量控制标准。
2.根据2015年版《中国药典》四部附录相应方法，对15批次红核妇洁洗液的【性状】、【鉴别】、【检查】、【含量测定】等内容进行检测，完善与提升红核妇洁洗液的质量控制标准。
3.采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）分析鉴定红核妇洁洗液中化学成分，对其中的糠醛、愈创木酚、2,6-二甲基苯酚、2-甲基苯酚、苯酚、4-甲基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、4-丙基愈创木酚、1,2,3-三甲氧基苯、3,4,5-三甲氧基甲苯等10种有效成分进行定性定量分析。
4.采用气相色谱法（GC-FID）建立红核妇洁洗液的指纹图谱。
5.采用连续二倍稀释法，观察红核妇洁洗液对白色念珠菌（Candidaalbicans）抑制作用，并测定其最小抑菌浓度（MIC）；建立体外C.albicans生物被膜模型，采用XTT法检测红核妇洁洗液对不同阶段C.albicans生物被膜的抑制作用；采用芽管生成试验，检测红核妇洁洗液对C.albicans芽管萌发的抑制率。
6.通过构建VVC大鼠模型，采用阴道涂片检查和病理组织检测法，对红核妇洁洗液的药效学进行再评价研究。
7.采用qPCR技术，检测红核妇洁洗液对C.albicans毒力基因、影响细胞壁及细胞膜相关合成基因的调控作用，从分子水平揭示红核妇洁洗液抗C.albicans的作用机制。
结果:1.在山楂核原有质量标准的基础上，提高了山楂核的水分、总灰分、浸出物的限度要求，新增重金属检测项，具体要求如下：山楂核杂质不得过4%；山楂核水分不得过10%；山楂核总灰分不得过1.5%；山楂核醇溶性浸出物不得少于5.5%；山楂核重金属不得过1ppm。
2.在红核妇洁洗液原有质量标准基础上，【鉴别】项下新增加了酚类物质、醛类物质的显色反应鉴别；【含量测定】项下新增加了酸值、羰基化合物含量检测内容；【检查】项下新增了微生物限度检查。根据15批次样品检测结果，可将红核妇洁洗液中含酸量限度确定为不少于5%，羰基化合物含量限度确定为不少于5%
3.建立的红核妇洁洗液气相指纹图谱色谱条件为：HP-5（聚二甲基硅氧烷）石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm），程序升温：炉温60℃保持5min，5℃·min-1升至200℃保持5min，5℃·min-1升至220℃保持5min，3℃·min-1升至260℃保持10min，进样口温度260℃，分流比30∶1，进样量1μL。15批样品的气相色谱图相似度均在0.95以上，共标定33个共有峰，确定归属的8个共有峰分别为为：糠醛、苯酚、2-甲基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、1,2,3-三甲氧基苯、3,4,5-三甲氧基甲苯、2,6-二甲氧基苯酚。
4.根据红核妇洁洗液的GC-MS检测结果，分析鉴别出了红核妇洁洗液中的61种化学成分，主要包括酮类21种，占总含量的5.99%；醛类4种，占总含量的55.97%；酚类13种，占总含量的28.55%；苯类8种占总含量的4.79%；酯类8种、烷烃类4种，占总含量的0.25%；呋喃类2种，占总含量的0.36%；醇类1种，占总含量的0.1%。其中，红核妇洁洗液中糠醛平均含量为（4.1388mg·mL-1）、愈创木酚平均含量为（0.284mg·mL-1）、2,6-二甲基苯酚平均含量为（0.0046mg·mL-1）、2-甲基苯酚平均含量为（0.0279mg·mL-1）、苯酚平均含量为（0.0295mg·mL-1）、4-甲基愈创木酚平均含量为（0.3007mg·mL-1）、2,6-二甲氧基苯酚平均含量为（0.261mg·mL-1）、4-丙基愈创木酚平均含量为（0.0181mg·mL-1）、1,2,3-三甲氧基苯平均含量为（0.0149mg·mL-1）、3,4,5-三甲氧基甲苯平均含量为（0.0022mg·mL-1）。
5.体外抗菌试验结果表明，红核妇洁洗液的MIC为原液稀释64倍浓度。红核妇洁洗液能够抑制C.albicans菌落形成，且呈一定的浓度依赖性，并能显著降低C.albicans的粘附性，抑制C.albicans芽管生长。
6.VVC模型大鼠试验结果表明，红核妇洁洗液能够显著抑制VVC模型大鼠阴道内C.albicans菌落形成，减少炎性细胞对阴道粘膜的浸润。
7.qPCR研究结果表明，红核妇洁洗液能够显著降低C.albicanscAMP通路中HWP1、ALS3、ECE1等粘附性相关基因的表达；下调C.albicansRas1-cAMP-Efg1通路中促菌丝生长及生物被膜形成的EFG1基因表达；下调维持细胞膜结构的主要组分麦角甾醇合成通路中ERG1、ERG7等关键基因的表达；上调破坏细胞壁完整性的调控钙调神经磷酸酶CRZ1及MAP激酶途径的BCK1基因表达，上调破坏生物被膜维持促分散的HSP90基因。
结论:1.通过本论文的研究，增加及提升了红核妇洁洗液原料药及成品的质量控制指标，建立了较为完善的红核妇洁制剂质量控制体系，提升了红核妇洁洗液的质量控制标准。
2.通过本论文的研究，从体外及体内对红核妇洁洗液抗VVC的药效学进行了再评价，为红核妇洁洗液的进一步临床应用提供了研究依据。
3.红核妇洁洗液可通过调控白念菌细胞膜、细胞壁及其毒力因子相关基因的表达，发挥综合抗菌作用，从分子水平初步揭示了红核妇洁洗液治疗VVC的作用机制。
方法:1.采集15批次不同产地来源的山楂核，根据2015年版《中国药典》四部附录相应方法，对包括其性状、杂质、鉴别、浸出物等内容进行检测，完善与提升山楂核的质量控制标准。
2.根据2015年版《中国药典》四部附录相应方法，对15批次红核妇洁洗液的【性状】、【鉴别】、【检查】、【含量测定】等内容进行检测，完善与提升红核妇洁洗液的质量控制标准。
3.采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）分析鉴定红核妇洁洗液中化学成分，对其中的糠醛、愈创木酚、2,6-二甲基苯酚、2-甲基苯酚、苯酚、4-甲基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、4-丙基愈创木酚、1,2,3-三甲氧基苯、3,4,5-三甲氧基甲苯等10种有效成分进行定性定量分析。
4.采用气相色谱法（GC-FID）建立红核妇洁洗液的指纹图谱。
5.采用连续二倍稀释法，观察红核妇洁洗液对白色念珠菌（Candidaalbicans）抑制作用，并测定其最小抑菌浓度（MIC）；建立体外C.albicans生物被膜模型，采用XTT法检测红核妇洁洗液对不同阶段C.albicans生物被膜的抑制作用；采用芽管生成试验，检测红核妇洁洗液对C.albicans芽管萌发的抑制率。
6.通过构建VVC大鼠模型，采用阴道涂片检查和病理组织检测法，对红核妇洁洗液的药效学进行再评价研究。
7.采用qPCR技术，检测红核妇洁洗液对C.albicans毒力基因、影响细胞壁及细胞膜相关合成基因的调控作用，从分子水平揭示红核妇洁洗液抗C.albicans的作用机制。
结果:1.在山楂核原有质量标准的基础上，提高了山楂核的水分、总灰分、浸出物的限度要求，新增重金属检测项，具体要求如下：山楂核杂质不得过4%；山楂核水分不得过10%；山楂核总灰分不得过1.5%；山楂核醇溶性浸出物不得少于5.5%；山楂核重金属不得过1ppm。
2.在红核妇洁洗液原有质量标准基础上，【鉴别】项下新增加了酚类物质、醛类物质的显色反应鉴别；【含量测定】项下新增加了酸值、羰基化合物含量检测内容；【检查】项下新增了微生物限度检查。根据15批次样品检测结果，可将红核妇洁洗液中含酸量限度确定为不少于5%，羰基化合物含量限度确定为不少于5%
3.建立的红核妇洁洗液气相指纹图谱色谱条件为：HP-5（聚二甲基硅氧烷）石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm），程序升温：炉温60℃保持5min，5℃·min-1升至200℃保持5min，5℃·min-1升至220℃保持5min，3℃·min-1升至260℃保持10min，进样口温度260℃，分流比30∶1，进样量1μL。15批样品的气相色谱图相似度均在0.95以上，共标定33个共有峰，确定归属的8个共有峰分别为为：糠醛、苯酚、2-甲基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、1,2,3-三甲氧基苯、3,4,5-三甲氧基甲苯、2,6-二甲氧基苯酚。
4.根据红核妇洁洗液的GC-MS检测结果，分析鉴别出了红核妇洁洗液中的61种化学成分，主要包括酮类21种，占总含量的5.99%；醛类4种，占总含量的55.97%；酚类13种，占总含量的28.55%；苯类8种占总含量的4.79%；酯类8种、烷烃类4种，占总含量的0.25%；呋喃类2种，占总含量的0.36%；醇类1种，占总含量的0.1%。其中，红核妇洁洗液中糠醛平均含量为（4.1388mg·mL-1）、愈创木酚平均含量为（0.284mg·mL-1）、2,6-二甲基苯酚平均含量为（0.0046mg·mL-1）、2-甲基苯酚平均含量为（0.0279mg·mL-1）、苯酚平均含量为（0.0295mg·mL-1）、4-甲基愈创木酚平均含量为（0.3007mg·mL-1）、2,6-二甲氧基苯酚平均含量为（0.261mg·mL-1）、4-丙基愈创木酚平均含量为（0.0181mg·mL-1）、1,2,3-三甲氧基苯平均含量为（0.0149mg·mL-1）、3,4,5-三甲氧基甲苯平均含量为（0.0022mg·mL-1）。
5.体外抗菌试验结果表明，红核妇洁洗液的MIC为原液稀释64倍浓度。红核妇洁洗液能够抑制C.albicans菌落形成，且呈一定的浓度依赖性，并能显著降低C.albicans的粘附性，抑制C.albicans芽管生长。
6.VVC模型大鼠试验结果表明，红核妇洁洗液能够显著抑制VVC模型大鼠阴道内C.albicans菌落形成，减少炎性细胞对阴道粘膜的浸润。
7.qPCR研究结果表明，红核妇洁洗液能够显著降低C.albicanscAMP通路中HWP1、ALS3、ECE1等粘附性相关基因的表达；下调C.albicansRas1-cAMP-Efg1通路中促菌丝生长及生物被膜形成的EFG1基因表达；下调维持细胞膜结构的主要组分麦角甾醇合成通路中ERG1、ERG7等关键基因的表达；上调破坏细胞壁完整性的调控钙调神经磷酸酶CRZ1及MAP激酶途径的BCK1基因表达，上调破坏生物被膜维持促分散的HSP90基因。
结论:1.通过本论文的研究，增加及提升了红核妇洁洗液原料药及成品的质量控制指标，建立了较为完善的红核妇洁制剂质量控制体系，提升了红核妇洁洗液的质量控制标准。
2.通过本论文的研究，从体外及体内对红核妇洁洗液抗VVC的药效学进行了再评价，为红核妇洁洗液的进一步临床应用提供了研究依据。
3.红核妇洁洗液可通过调控白念菌细胞膜、细胞壁及其毒力因子相关基因的表达，发挥综合抗菌作用，从分子水平初步揭示了红核妇洁洗液治疗VVC的作用机制。