研究背景中医中药是中华民族的宝贵财富,随着中医中药研究的不断深入,中药由于其在防治常见病、多发病、慢性病、重大疾病中的疗效和作用以及毒副作用低的特点而越来越受到人们的肯定和接受。但是,中药在使用时也有自身的缺点:如中药煎煮不便,火候难以把握,以及外出时携带不便,这些都是现代人在使用中药时不可避免会遇到的问题。而配方颗粒作为中药现代化的产物,旨在解决上述问题。中药配方颗粒是在中医中药的理论指导下,以传统的饮片作为原料,利用现代化的制药技术,经水提取、浓缩、干燥、制粒和包装等工序精制而成,供临床配方使用的颗粒剂。中药配方颗粒在一定程度上克服了传统中药的缺点,但作为传统饮片的一种补充,目前大多数品种尚缺乏规范的质量标准,药效和传统中药饮片是否一致也需要更进一步的研究与对比。本课题以黄精配方颗粒为研究对象,拟对其质量标准和药效学评价进行初步研究。首先,在定性检测方面运用薄层色谱法和高效液相色谱法分别建立了黄精配方颗粒TLC薄层色谱和HPLC指纹图谱;其次,在定量检测方面测定了黄精配方颗粒中黄精多糖、总酚、以及5-羟甲基糠醛（5-HMF）的含量,从定性和定量两个方面来评价黄精配方颗粒的质量。此外,通过建立小鼠环磷酰胺免疫缺陷模型来进行黄精配方颗粒的药效学评价,为后续黄精配方颗粒的开发提供依据。研究方法1.采用TLC法对12批不同产地的黄精制成的配方颗粒进行定性鉴别。2.采用紫外分光光度法分别测定12批不同产地黄精配方颗粒的黄精多糖和总酚含量。3.采用HPLC法测定12批不同产地黄精配方颗粒的5-羟甲基糠醛的含量。色谱条件:色谱柱为Intersil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:乙腈-0.085%磷酸水溶液（5︰95）;流速:0.8 mL/min;柱温:35℃;检测波长:274nm;进样量:10μL。4.采用HPLC法建立黄精配方颗粒指纹图谱。色谱条件:Kromaisil C₁₈（250mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-0.085%磷酸水溶液进行梯度洗脱;流速:0.4 mL/min;柱温:26℃;检测波长:254 nm;进样量:20μL,采集时间为70min。5.通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺的方式来建造小鼠免疫抑制模型。给予动物不同剂量的黄精配方颗粒（750 mg/kg、1500 mg/kg、3000 mg/kg）或阳性药左旋咪唑（20mg/kg）,通过记录小鼠给药第一天体重到给药第16天的体重来测定黄精配方颗粒对免疫抑制小鼠的体重影响;测量小鼠胸腺指数和脾脏指数;采用Elisa法测定小鼠血清和脾脏中TNF-α、IL-2和IL-10浓度变化,通过免疫荧光法测定小鼠脾脏CD4⁺T和CD8⁺T表达。研究结果1.TLC法斑点清晰、分离度好、专属性强、Rf值适中。2.无水葡萄糖在0.03328⁰.19968 mg/mL范围内,在582 nm处质量浓度与吸光度值有良好的线性关系,线性方程为y₁=4.034x₁+0.028,r₁=0.9993（n=6）。平均回收率为98.24%,RSD值为2.23%;12批配方颗粒的多糖含量为22.51⁴8.14 mg/g;没食子酸在0.0052⁰.052 mg/mL范围内,765nm处质量浓度与吸光度值有良好的线性关系,线性方程为y₂=12.94x₂+0.14,r₂=0.9996（n=9）,平均回收率为98.96%,RSD值为0.68%,总酚含量为11.31¹8.95 mg/g。3.5-羟甲基糠醛在0.020².000 mg/mL范围内,进样量与峰面积有良好的线性关系,线性方程为y₃=15468610x₃-663735,r₃=0.9991（n=6）,平均回收率为97.16%,RSD值为1.07%,5-羟甲基糠醛含量为0.5736⁰.8916 mg/g。4.建立12批不同产地的黄精配方颗粒的指纹图谱,其稳定性,重复性,分离度,专属性均较好,其相似度均大于0.9。共确定了8个共有峰,其中7号峰为5-羟甲基糠醛。5.在体重变化方面,黄精配方颗粒对免疫低下的小鼠体重没有明显的改善作用。在胸腺指数和脾脏指数变化方面,黄精配方颗粒可以提高免疫抑制小鼠的胸腺质量和脾脏质量;可以上调血清和脾脏的TNF-α、IL-2的浓度和降低IL-10的浓度,促进CD4⁺T和CD8⁺T细胞的表达。研究结论1.所建立的黄精配方颗粒TLC法和黄精配方颗粒的含量检测方法简单可行、专属性强、重复性好,可列为黄精配方颗粒的质量标准。2.所建立的黄精配方颗粒的HPLC指纹图谱,方法简单,稳定可靠,可以全面评价不同产地的黄精配方颗粒。3.黄精配方颗粒对免疫低下的小鼠体重没有明显的改善作用,但是可以刺激胸腺质量和脾脏质量的增长来增强免疫功能,通过调节各种细胞炎性因子来促进CD4⁺T和CD8⁺T细胞的表达增强免疫功能。4.综上所述,本课题通过建立黄精配方颗粒的含量测定和HPLC指纹图谱方法,全面评价不同产地的黄精配方颗粒质量。通过评价黄精配方颗粒的免疫调节功能,为进一步开发黄精药材和推动黄精配方颗粒的发展提供了实验依据。