【摘 要】
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目的研究复方蜥蜴散凝胶对UC大鼠结肠上皮紧密连接（tight junction,TJ）相关蛋白表达的调控,探讨复方蜥蜴散凝胶治疗溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）模型大鼠的机制。方法选用SPF级SD雄性大鼠,110只大鼠以TNBS-50%乙醇溶液灌肠法制备大鼠UC模型,10只为空白组,不做处理。造模结束后,根据大鼠一般状态,粪便隐血,随机抽取5只大鼠杀检、病变结肠病理学观察
【基金项目】
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2019年国家自然基金项目（项目编号:81960859）；
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目的研究复方蜥蜴散凝胶对UC大鼠结肠上皮紧密连接（tight junction,TJ）相关蛋白表达的调控,探讨复方蜥蜴散凝胶治疗溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）模型大鼠的机制。方法选用SPF级SD雄性大鼠,110只大鼠以TNBS-50%乙醇溶液灌肠法制备大鼠UC模型,10只为空白组,不做处理。造模结束后,根据大鼠一般状态,粪便隐血,随机抽取5只大鼠杀检、病变结肠病理学观察,验证UC模型是否制备成功。造模成功后,将造模大鼠随机分为模型对照组（生理盐水灌胃）、复方蜥蜴散凝胶不同剂量组（复方蜥蜴散凝胶0.07 g/ml、0.14 g/ml、0.28g/ml分别为低、中、高浓度喂养）,柳氮磺吡啶组（柳氮磺吡啶灌胃）,空白对照组（生理盐水灌胃）,实验过程中记录大鼠一般行为表现。连续治疗14d后,麻醉杀检,取病变结肠组织,部分组织石蜡切片,HE染色观察结肠组织病理表现,IHC法检测紧密连接蛋白Claudin-1、Zonulin、Occludin、Cingulin、ZO-1的表达,Tunel法检测结肠上皮组织细胞凋亡状况;部分组织用于Western-blot法检测上述肠上皮紧密连接蛋白的定量表达,并运用统计学软件统计分析。结果1.一般行为观察:空白组大鼠精神佳,动作敏捷爱动,大便色淡黄成形、饮食饮水正常、体重正常增长;造模后大鼠均陆续出现饮水及食量减少、精神萎靡、扎堆、活动减少,拱背、毛色晦暗无泽,大便稀溏或便中可见黏液或血,体重明显减少。治疗后,空白对照组大鼠毛发光亮,活动可,饮食饮水正常,便质成型较软,体重正常增长趋势;模型对照组大鼠精神差,不爱动,体型瘦小,毛发干枯暗淡无泽,食量及饮水减少,体重增长缓慢,大便稀溏或黏液血便;复方蜥蜴散凝胶高、中、低剂量组及柳氮磺吡啶组,食量、精神状态较佳、活跃、毛色光洁,大便基本成型。2.结肠组织病理学观察:模型对照组大鼠结肠上皮细胞受损严重、腺体破坏、溃疡,炎性细胞多处浸润。与模型对照组相比,柳氮磺吡啶组、复方蜥蜴散凝胶低、中、高剂量组大鼠肠上皮细胞损伤程度好转,溃疡程度减轻,炎性细胞浸润减少。3.免疫组化结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠TJ蛋白平均吸收光密度值（AOD）,Cingulin、Occludin、ZO-1、Claudin-1明显降低,Zonulin明显增高,差异有统计学意义（p＜0.01）;各治疗组与模型对照组比较,平均吸收光密度值有统计学意义（p＜0.05）;不同剂量之间有统计学意义（p＜0.05）,其中以Claudin-1、Occludin、Cingulin、ZO-1四个蛋白的高剂量组平均吸收光密度值最高,Zonulin蛋白的高剂量组平均吸收光密度值最低。4.Tunel染色结果:光镜下,可见正常结肠组织中凋亡细胞主要出现在结肠组织黏膜损伤处;高倍镜（x200）下计数,与空白对照组对比,模型对照组凋亡细胞数明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;中药不同浓度及阳性治疗组与模型对照组比较有显著性差异（P＜0.05）,其中以复方蜥蜴散凝胶高剂量组的凋亡指数最低。5.Western-blot结果:与空白对照组相比,模型对照组和各治疗组,Cingulin、Occludin、ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平明显降低,Zonulin蛋白表达水平明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型对照组比较,复方蜥蜴散凝胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、柳氮磺吡啶组,Cingulin、Occludin、ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平均显著增高,Zonulin蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,Cingulin、Occludin、ZO-1、Claudin-1以复方蜥蜴散凝胶高剂量组蛋白表达值最高,Zonulin以高剂量组最低。结论1.复方蜥蜴散凝胶可修复肠道黏膜屏障功能,其机制主要是通过干预TJ蛋白Claudin-1、Zonulin、Occludin、Cingulin、ZO-1的定位和表达,维持紧密连接结构完整,修复肠道黏膜屏障功能。2.在干预溃疡性结肠炎模型大鼠的结果中,复方蜥蜴散凝胶不同剂量对蛋白表达的影响不同,说明中药浓度同样是影响结果的重要因素。3.复方蜥蜴散凝胶可通过调节上皮细胞凋亡情况来发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。
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