基于二代测序技术的抗三阴性乳腺癌中药筛选及其抗癌机理研究

来源 :青海大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:SuperMMX
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目的:乳腺癌治疗中的一个世界性难题是三阴性乳腺癌的临床治疗目前没有特效药物。本研究以MDA-MB-231细胞为模型,应用基于二代测序的高通量筛选技术发现中药余甘子具有抗三阴性乳腺癌作用,并进一步研究余甘子抗三阴性乳腺癌机理。方法:1.以二代测序为基础的高通量技术筛选出余甘子,进行差异表达基因KEGG富集分析。2.设置实验组和对照组,在体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用四氮唑蓝(MTT)比色法检测经余甘子(320、160、80、40、20、10、5μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞活性并计算IC50;3.流式细胞术分析经余甘子(20μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞的周期变化;4.细胞划痕实验判断余甘子(20μg/m L)处理后MDA-MB-231细胞迁移能力;5.荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测经余甘子(20μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的Cyclin G2和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21的表达水平;6.KMplot数据库分析三阴性乳腺癌患者Cyclin G2、p21的表达与预后情况。结果:与对照组比较,余甘子(320、160、80、40、20、10、5μg/m L)在体外对MDA-MB-231细胞活性具有明显的抑制作用(P<0.05),且这种抑制作用呈浓度依赖效应;余甘子(20μg/m L)可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖,细胞周期阻滞在G1/S期;余甘子(20μg/m L)能显著上调MDA-MB-231细胞中Cyclin G2、p21 m RNA的表达水平(P<0.05);余甘子(20μg/m L)细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显高于对照组,而抑制后细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显低于对照组;通过KMplot分析临床数据提示高表达Cyclin G2、p21水平具有潜在增加三阴性乳腺癌患者良好预后的作用。结论:应用基于二代测序的高通量筛选技术发现中药余甘子(20μg/m L)具有抗三阴性乳腺癌作用,其机制可能与上调Cyclin G2、p21 m RNA水平有关。
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