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【中图分类号】R921.2 【文献标识码】A 【文章编号】1550-1868（2015）02
【摘要】目的：采用高效液相色谱法测定骨刺片中士的宁的含量。方法：士的宁检测色谱柱为C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）（21：79），检测波长为260nm。结果：士的宁进样量在0.1422-1.0662μg与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.98%，RSD=0.55%（n=6）。结论：该方法操作准确，分离度、稳定性、重复性好，可用于骨刺片的质量控制。
【关键词】骨刺片；高效液相色谱法；士的宁；含量测定
绪 言
骨刺片是由昆布、骨碎补、党参、桂枝、威灵仙、牡蛎、杜仲叶、鸡血藤、附片、制川乌、制草乌、 延胡索、白芍、三七、马钱子粉15味药材按一定的比例配伍而成。本方组方严谨，主要用于散风邪，祛寒湿，舒筋活血，通络止痛。用于颈椎、胸椎、腰椎、跟骨等骨关节增生性疾病，对风湿、类风湿性关节炎有一定疗效。
由于骨刺片中含有士的宁和马钱子碱，患者应严格在医生指导下服用，不得任意增加服用量，不宜长期服用，运动员需慎服。目前骨刺片质量控制主要采用薄层色谱法测定士的宁的含量，此法在检验过程中的重现性和可靠性不高。本研究采用HPLC对3批次骨刺片样品中的士的宁含量进行全面的研究，结果表明此法准确可靠、重复性高，稳定性较好，可以为骨刺片质量标准提升提供参考。
1.仪器与试药
1.1仪器
agilent 1100高效液相色谱仪；XS105电子分析天平；AL204电子分析天平；HH数显恒温水浴锅。
1.2試药
士的宁对照品，来自中国食品药品检定研究院，含量：97.1%，批号110705-201307 。
骨刺片样品批号：1205703、1205704、1205705
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与 0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用 10%磷酸调节 pH 值至2.8）（21：79）为流动相；检测波长为 260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于 5000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取士的宁对照品适量，加三氯甲烷-甲醇（3：7）制成每 1ml含 60μg的溶液，即得。
2.3线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、15μl，注入高效液相色谱仪，按2.1色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），以士的宁的进样量为横坐标（X），绘制士的宁的标准曲线，得士的宁回归方程式：Y= 7.422+131.473X，士的宁在0.2798～2.0926mg/g，与峰面积线性关系良好。
2.4供试品溶液的制备
取本品 10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取 0.5g量细粉，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液 3ml，混匀，放置 30 分钟，精密加三氯甲烷 50ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取 2 小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液至装有少量无水硫酸钠的锥形瓶中，轻摇，放置 5分钟，精密吸取上清液 25ml，蒸干，残渣用三氯甲烷-甲醇（3：7）溶解，转移至 5ml量瓶中，用三氯甲烷-甲醇（3：7）稀释至刻度，摇匀，即得
2.5精密度实验
精密吸取供试品溶液（批号1205703）各10μl，按2.1色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结果士的宁的RSD为 0.61%，表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取样品骨刺片（批号1205703）1份，按2.3方法制备供试品样品，室温放置，分别与0，2，4，6，8h时进样测定，记录峰面积。结果士的宁的RSD为0.63 %，表明供试品在室温下至少在8h内稳定。
2.7重复性试验
取同一批骨刺片样品（批号1205703）6份，分别按2.3方法制备供试品样品，进样测定含量。结果表明士的宁的RSD为0.61 %，表明方法重复性良好。
2.8加样回收试验
取已知士的宁含量的骨刺片（批号1205703，士的宁含量为1.0080mg/g）6份，每份0.5g，精密称定，分别精密加入样品实际含量80%、100%、120%的士的宁对照品，按2.3方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，记过见表1。
2.9样品的含量测定
取3批骨刺片，批号为1205703、1205704、1205705，每批取1个样，按2.3方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表2
3.讨论
我们从色谱条件、精密度实验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验，可以确立用HPLC测定骨刺片中的士的宁含量的方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中华人民共和国药典.（2010版）1部[M].中国医药科技出版社.2010：附录36
[2]潘金火，严国俊等.马钱子粉中士的宁和马钱子碱含量测定方法的研究[M].中国药学杂志.2010（13）：214-216
[3]徐丽华，鲁静.HPLC法测定马钱子及其制剂中士的宁与马钱子碱的含量[J].药物分析杂志.2011，17（3）：193-194
【摘要】目的：采用高效液相色谱法测定骨刺片中士的宁的含量。方法：士的宁检测色谱柱为C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值至2.8）（21：79），检测波长为260nm。结果：士的宁进样量在0.1422-1.0662μg与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.98%，RSD=0.55%（n=6）。结论：该方法操作准确，分离度、稳定性、重复性好，可用于骨刺片的质量控制。
【关键词】骨刺片；高效液相色谱法；士的宁；含量测定
绪 言
骨刺片是由昆布、骨碎补、党参、桂枝、威灵仙、牡蛎、杜仲叶、鸡血藤、附片、制川乌、制草乌、 延胡索、白芍、三七、马钱子粉15味药材按一定的比例配伍而成。本方组方严谨，主要用于散风邪，祛寒湿，舒筋活血，通络止痛。用于颈椎、胸椎、腰椎、跟骨等骨关节增生性疾病，对风湿、类风湿性关节炎有一定疗效。
由于骨刺片中含有士的宁和马钱子碱，患者应严格在医生指导下服用，不得任意增加服用量，不宜长期服用，运动员需慎服。目前骨刺片质量控制主要采用薄层色谱法测定士的宁的含量，此法在检验过程中的重现性和可靠性不高。本研究采用HPLC对3批次骨刺片样品中的士的宁含量进行全面的研究，结果表明此法准确可靠、重复性高，稳定性较好，可以为骨刺片质量标准提升提供参考。
1.仪器与试药
1.1仪器
agilent 1100高效液相色谱仪；XS105电子分析天平；AL204电子分析天平；HH数显恒温水浴锅。
1.2試药
士的宁对照品，来自中国食品药品检定研究院，含量：97.1%，批号110705-201307 。
骨刺片样品批号：1205703、1205704、1205705
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与 0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用 10%磷酸调节 pH 值至2.8）（21：79）为流动相；检测波长为 260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于 5000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取士的宁对照品适量，加三氯甲烷-甲醇（3：7）制成每 1ml含 60μg的溶液，即得。
2.3线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、15μl，注入高效液相色谱仪，按2.1色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），以士的宁的进样量为横坐标（X），绘制士的宁的标准曲线，得士的宁回归方程式：Y= 7.422+131.473X，士的宁在0.2798～2.0926mg/g，与峰面积线性关系良好。
2.4供试品溶液的制备
取本品 10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取 0.5g量细粉，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液 3ml，混匀，放置 30 分钟，精密加三氯甲烷 50ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取 2 小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液至装有少量无水硫酸钠的锥形瓶中，轻摇，放置 5分钟，精密吸取上清液 25ml，蒸干，残渣用三氯甲烷-甲醇（3：7）溶解，转移至 5ml量瓶中，用三氯甲烷-甲醇（3：7）稀释至刻度，摇匀，即得
2.5精密度实验
精密吸取供试品溶液（批号1205703）各10μl，按2.1色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结果士的宁的RSD为 0.61%，表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取样品骨刺片（批号1205703）1份，按2.3方法制备供试品样品，室温放置，分别与0，2，4，6，8h时进样测定，记录峰面积。结果士的宁的RSD为0.63 %，表明供试品在室温下至少在8h内稳定。
2.7重复性试验
取同一批骨刺片样品（批号1205703）6份，分别按2.3方法制备供试品样品，进样测定含量。结果表明士的宁的RSD为0.61 %，表明方法重复性良好。
2.8加样回收试验
取已知士的宁含量的骨刺片（批号1205703，士的宁含量为1.0080mg/g）6份，每份0.5g，精密称定，分别精密加入样品实际含量80%、100%、120%的士的宁对照品，按2.3方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，记过见表1。
2.9样品的含量测定
取3批骨刺片，批号为1205703、1205704、1205705，每批取1个样，按2.3方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表2
3.讨论
我们从色谱条件、精密度实验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验，可以确立用HPLC测定骨刺片中的士的宁含量的方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中华人民共和国药典.（2010版）1部[M].中国医药科技出版社.2010：附录36
[2]潘金火，严国俊等.马钱子粉中士的宁和马钱子碱含量测定方法的研究[M].中国药学杂志.2010（13）：214-216
[3]徐丽华，鲁静.HPLC法测定马钱子及其制剂中士的宁与马钱子碱的含量[J].药物分析杂志.2011，17（3）：193-194