论文部分内容阅读
【中图分类号】R969.3【文献标识码】A【文章编号】1632-5281（2015）2
【摘要】目的：探讨产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药基因。方法：采用琼脂稀释法、聚合酶链反应检测和DNA测序仪进行测序，对来我院诊治的患者尿液、痰液、血液等标本中的大肠埃希菌的耐药性进行调查、分析。结果：86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。结论：大肠埃希菌上拥有多种β-内酰胺酶耐药基因，这就使得其对β-内酰胺类抗菌药物具有较高的耐药性。
【关键词】产超广谱β-内酰胺酶；大肠埃希菌；耐药性；基因
大肠埃希菌（ECO）是临床上常见的条件致病菌，其主要以尿道感染和菌血症等最为常见目前，大肠埃希菌的耐药性逐年增加，给临床治疗提出了更高的挑战。大肠埃希菌能够产生TEM、SHV、OXA等多种β-内酰胺酶以及DHA性的质粒型AmpC酶）。为了探讨产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药基因及分子流行病学，对86株大肠埃希菌的ESBLs进行了检测，并对16种β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因进行了分子生物学研究。报告如下。
1.资料与方法
1.1菌株从2013年6月-2014年9月在我院住院治疗的患者的尿液、痰液、血液等标本中分离出86株大肠埃希菌，并将检测出的产超光谱β-内酰胺酶大肠埃希菌进行耐药性分析。
1.2仪器采用Bactec9120血培养仪（美国BD公司生产）、Phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统（美国BD公司生产）以及ABI377基因测序仪和PCR扩增仪（美国PE公司生产）。
1.3菌株鉴定与药敏试验各临床科室对患者进行标本的采集，并将采集的标本送检。检验科将送检的标本进行及时的常规病原学检测，将检测的病原菌进行产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的鉴定。用NCCLS琼脂稀释法标准对6种β-内酰胺類抗菌药物抑菌浓度（MIC）进行测定。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）和肺炎克雷伯菌（ATCC700603）。
1.4DNA的抽提采用蛋白酶K消化法对DNA进行提取。
1.5基因PCR扩增以基因库中核苷酸序列为标准设计引物，采用PCR对基因进行扩增。PCR扩增具体过程为：首先93e预变性3min，其次93e变性1min，再次55e退火1min，最后72e持续5min，一共循环35次，用2%琼脂糖凝胶对20LlPCR产物上样电泳，采用EB染色，观察结果并进行拍照。
1.6基因序列分析先将PCR产物进行纯化，然后采用ABI377DNA测序仪进行测序，采用GenBank中的BLAST程序对测得序列进行同源分析。
2结果
2.1抗菌药物敏感性试验
从86株大肠埃希菌中检出37株超广谱β-内酰胺酶，阳性率为46.3%。37株大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类抗菌药物具有非常强的耐药性。氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南的MIC50均大于32Lg/ml。见表1。
2.2β-内酰胺酶基因检测结果
86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。
3.讨论
本次研究中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中常见的质粒介导的β-内酰胺酶是SHV-1，大多数大肠埃希菌产生的SHV-1酶由染色体编码。新的β-内酰胺类抗菌药物刚应用于临床就出现了耐药，其原因是细菌产生了新的β-内酰胺酶。本研究中的86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。本次研究与腹腔和胆道分离产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性基本一致。
研究结果提示，临床医生要科学合理选择抗菌药物，病原学检测和药敏检测依然是必不可少的环，根据病原学检测和药敏试验结果选用抗菌药物是科学合理使用抗菌药物关键所在。
【参考文献】
[1]鲁卫平，安琳，黎敏，等.近6年产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性动态观察分析[J].检验医学，2009，24（1）：5-8.
[2] Smet A， Martel A， Persoons D，et al. Diversity of extended-spectrumB-actamases and class CB-lactamases among cloacal Escherichia coliisolates in Belgian Broiler farms[J]. Antim-icrob Agents Chemother，2008，52（4）：1238-1243.
[3]李韵松，韦嘉，熊自忠.腹腔与胆道分离大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶菌株及其耐药性检测[J].中华医院感染学杂志，2009，19（5）：583-585.
[4] Pitout JD， Church DL， Gregson DB，etal. Molecular epidem-iology of CTX-M-producingEscherichia coliin the Calgary health region：emergence of CTX-M-15-producing isolates[J].Antimicrob Agents Chemother，2007，51（4）：1281-1286.
【摘要】目的：探讨产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药基因。方法：采用琼脂稀释法、聚合酶链反应检测和DNA测序仪进行测序，对来我院诊治的患者尿液、痰液、血液等标本中的大肠埃希菌的耐药性进行调查、分析。结果：86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。结论：大肠埃希菌上拥有多种β-内酰胺酶耐药基因，这就使得其对β-内酰胺类抗菌药物具有较高的耐药性。
【关键词】产超广谱β-内酰胺酶；大肠埃希菌；耐药性；基因
大肠埃希菌（ECO）是临床上常见的条件致病菌，其主要以尿道感染和菌血症等最为常见目前，大肠埃希菌的耐药性逐年增加，给临床治疗提出了更高的挑战。大肠埃希菌能够产生TEM、SHV、OXA等多种β-内酰胺酶以及DHA性的质粒型AmpC酶）。为了探讨产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药基因及分子流行病学，对86株大肠埃希菌的ESBLs进行了检测，并对16种β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因进行了分子生物学研究。报告如下。
1.资料与方法
1.1菌株从2013年6月-2014年9月在我院住院治疗的患者的尿液、痰液、血液等标本中分离出86株大肠埃希菌，并将检测出的产超光谱β-内酰胺酶大肠埃希菌进行耐药性分析。
1.2仪器采用Bactec9120血培养仪（美国BD公司生产）、Phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统（美国BD公司生产）以及ABI377基因测序仪和PCR扩增仪（美国PE公司生产）。
1.3菌株鉴定与药敏试验各临床科室对患者进行标本的采集，并将采集的标本送检。检验科将送检的标本进行及时的常规病原学检测，将检测的病原菌进行产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的鉴定。用NCCLS琼脂稀释法标准对6种β-内酰胺類抗菌药物抑菌浓度（MIC）进行测定。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）和肺炎克雷伯菌（ATCC700603）。
1.4DNA的抽提采用蛋白酶K消化法对DNA进行提取。
1.5基因PCR扩增以基因库中核苷酸序列为标准设计引物，采用PCR对基因进行扩增。PCR扩增具体过程为：首先93e预变性3min，其次93e变性1min，再次55e退火1min，最后72e持续5min，一共循环35次，用2%琼脂糖凝胶对20LlPCR产物上样电泳，采用EB染色，观察结果并进行拍照。
1.6基因序列分析先将PCR产物进行纯化，然后采用ABI377DNA测序仪进行测序，采用GenBank中的BLAST程序对测得序列进行同源分析。
2结果
2.1抗菌药物敏感性试验
从86株大肠埃希菌中检出37株超广谱β-内酰胺酶，阳性率为46.3%。37株大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类抗菌药物具有非常强的耐药性。氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南的MIC50均大于32Lg/ml。见表1。
2.2β-内酰胺酶基因检测结果
86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。
3.讨论
本次研究中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中常见的质粒介导的β-内酰胺酶是SHV-1，大多数大肠埃希菌产生的SHV-1酶由染色体编码。新的β-内酰胺类抗菌药物刚应用于临床就出现了耐药，其原因是细菌产生了新的β-内酰胺酶。本研究中的86株大肠埃希菌ESBLs的检出率是46.3%，其中40株大肠埃希菌被检测出TEM（阳性率为80.1%）、SHV（阳性率为79.0%）、CTX-M-1群（阳性率为20.9%）、OXA-1群（阳性率为11.1%）和DHA5种β-内酰胺酶基因（阳性率为5.2%）。本次研究与腹腔和胆道分离产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性基本一致。
研究结果提示，临床医生要科学合理选择抗菌药物，病原学检测和药敏检测依然是必不可少的环，根据病原学检测和药敏试验结果选用抗菌药物是科学合理使用抗菌药物关键所在。
【参考文献】
[1]鲁卫平，安琳，黎敏，等.近6年产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性动态观察分析[J].检验医学，2009，24（1）：5-8.
[2] Smet A， Martel A， Persoons D，et al. Diversity of extended-spectrumB-actamases and class CB-lactamases among cloacal Escherichia coliisolates in Belgian Broiler farms[J]. Antim-icrob Agents Chemother，2008，52（4）：1238-1243.
[3]李韵松，韦嘉，熊自忠.腹腔与胆道分离大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶菌株及其耐药性检测[J].中华医院感染学杂志，2009，19（5）：583-585.
[4] Pitout JD， Church DL， Gregson DB，etal. Molecular epidem-iology of CTX-M-producingEscherichia coliin the Calgary health region：emergence of CTX-M-15-producing isolates[J].Antimicrob Agents Chemother，2007，51（4）：1281-1286.