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目的:血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)损伤在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发病机制中起着重要作用,而VECs自噬水平的适度调节可以减轻细胞损伤,对AS的发展具有保护作用,但其调节机制还未被阐明。MicroRNAs是一类新发现的表观遗传调控因子,通过特异性下调靶基因的转录后表达参与调控细胞的增殖、分化和凋亡等多种生物学过程。冠心病患者外周血microRNA-214-3p(miR-214-3p)水平已被报道与病情严重程度相关,但内皮特异性表达的miR-214-3p在AS中的作用还没有研究。本研究旨在探讨miR-214-3p是否参与AS斑块内皮细胞的自噬调节并阐明其机制,以期为AS的治疗提供新的干预靶点。方法:一)体内实验:使用高脂喂养ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠12周作为AS模型;利用流式细胞仪分选出CD31+的主动脉弓段VECs后,我们检测了细胞中miR-214-3p的表达水平和自噬相关基因(autophagy-related genes,ATGs)的蛋白表达水平,并分析了miR-214-3p与ATG5和ATG12蛋白水平的相关性;进行生物信息学分析和双荧光素酶报告基因测定确认miR-214-3p的靶基因;二)体外实验:用100μg/mL 氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)12h,然后转染miR-214-3p模拟物/抑制剂,采用western blotting检测自噬相关蛋白表达水平;采用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观测胞质内自噬体数目变化;免疫荧光检测胞质内蛋白微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(protein microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3B-Ⅱ)的表达量及分布;油红O染色检测胞质内脂质积累情况;检测细胞对THP-1单核细胞的粘附能力;CCK-8检测细胞活力,TUNNEL实验检测细胞凋亡,同时检测caspase-3/cleaved caspase-3蛋白水平。结果:在AS小鼠模型中,我们发现血管损伤处VECs中miR-214-3p表达水平显著上调,伴随自噬相关蛋白水平明显下调;相关性分析显示miR-214-3p与ATG5和ATG12蛋白水平呈负相关(R=0.461,p=0.003;R=0.412,p=0.013);在体外实验中,我们观察到ox-LDL可以诱导群体倍增数(Population Doublings,PDL)为5的年轻HUVECs的自噬,同时miR-214-3p水平降低;过表达miR-214-3p可以抑制ox-LDL诱发的自噬,表现为ATG5、ATG12-ATG5、ATG12和LC3B-Ⅱ蛋白水平下降,SQSTM1/P62蛋白水平升高,胞质内LC3B-Ⅱ荧光强度减弱及自噬体数目减少;过表达miR-214-3p可以降低PDL5 HUVEC的细胞活力,并增加细胞凋亡;此外,miR-214-3p还能促进胞质中脂质积聚和THP-1细胞粘附;相反,在PDL36的衰老HUVECs中,ox-LDL刺激后表现为细胞自噬被抑制,同时miR-214-3p水平升高;低表达miR-214-3p可以恢复ox-LDL抑制的自噬,增加细胞活力,减少细胞凋亡,同时胞质中脂质积累和THP-1细胞粘附均减少。结论:在小鼠AS模型中,血管损伤处miR-214-3p水平显著上升,其水平与自噬蛋白ATG5和ATG12水平负相关;体外实验中,miR-214-3p可以通过抑制HUVECs中ox-LDL刺激的自噬水平,从而损伤内皮细胞功能,其作用可能是通过直接靶向作用于ATG5实现的,该调节途径可能为治疗AS中内皮细胞的损伤提供新的靶点。