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【摘 要】目的：研究配伍肉桂、桂枝对制马钱子在风湿病治疗中抗炎镇痛的影响。方法：通过醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验与热板致痛法实验，研究分别配伍不同剂量肉桂及桂枝对马钱子抗炎、镇痛的影响。结果：配伍肉桂对马钱子的抗炎与镇痛无明显作用，配伍桂枝不能提高马钱子的镇痛作用，但能明显增强马钱子的抗炎作用。结论：为安全、合理、有效的使用制马钱子治疗风湿病，提供实验依据。
【关键词】 制马钱子；肉桂；桂枝；抗炎；镇痛；实验研究
风湿病是临床常见且在治疗上又很棘手的疑难病之一。全国名老中医药专家娄多峰教授总结多年治疗风湿病的临床经验[1]，指出风湿病的临床表现以肢体关节疼痛、重着、麻木、肿胀、屈伸不利、甚者关节变形或累及脏腑为主，疼痛与肿胀是临床常见症状，同时又给患者带来极大的痛苦，因此，治疗风湿病的炎症与疼痛是临床上亟待解决的问题。西医的抗炎镇痛药物对肝肾都有一定程度的损害，研制和开发具有镇痛、抗炎作用的中药是很有价值的。本实验以娄玉钤教授多年运用制马钱子治疗风湿病的临床经验为依据，且前期实验已经证明配伍肉桂及桂枝对制马钱子均有解毒作用[2]，来进一步研究配伍肉桂及桂枝对马钱子抗炎、镇痛疗效的影响，为临床运用马钱子配伍治疗风湿病提供现代药理学基础，并进一步丰富中医复方配伍理论。
1 实验材料
1.1 药 品 ①马钱子：经砂烫法炮制后的马钱子置超微粉碎机中，粉碎10 min，药物粉末过200目筛，用高效液相色谱仪测得士的宁含量为14.43 mg·g-1，
马钱子碱4.79 mg·g-1。②肉桂：取肉桂饮片，置超微粉碎机中，粉碎10 min，药物粉末过200目筛，即得。③桂枝：取桂枝饮片，置煎药机中，加10倍量水，煎煮1 h，浓缩，干燥，粉碎，药物粉末过200目筛，即得。1 g 浸膏粉相当于原生药1.41 g。
本实验所选取的制马钱子与肉桂、桂枝配伍比例是娄玉钤教授在长期的临床实践中，摸索出马钱子的用药规律，但是缺乏实验数据的证明。配伍比例组为肉桂69%组（肉桂占马钱子与肉桂混合物的百分比为69%，下同）、肉桂86%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组及桂枝95.20%。
以上药物均由河南风湿病医院购买提供，统一购于河南省药材公司，且经该院中药鉴定教研室鉴定；由河南中医学院药学院刘雅敏教授统一制备、打粉，密闭备用。
1.2 动 物 SPF级昆明小鼠，体质重18～22 g，抗炎实验雌雄各半，镇痛实验仅用雌鼠，由郑州大学动物实验中心提供，合格证号0008746，在河南中医学院动物实验中心统一喂养。
2 方 法
2.1 实验方法 分抗炎、镇痛两个单独的实验进行。制马钱子Dm（最小100%死亡量）为90.0 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）为50.0 mg·kg-1[3]。
2.1.1 抗炎实验 SPF级昆明种小白鼠80只，雌雄各半，按体质重随机分为8组，每组10只，分别为空白组、制马钱子粉组、肉桂69%组、肉桂86%组、肉桂91%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组、桂枝95.20%组。空白组灌等容量生理盐水，小鼠灌胃量为每10 g体质重给予0.3 mL药液。连续灌胃给药5 d，每日1次，末次灌胃给药30 min后，各小鼠尾静脉注射5 g·L-1依文思兰溶液0.1 ml∶10 g，
随即腹腔注射6 g·L-1的冰醋酸溶液0.1 ml∶10 g，20 min后颈椎脱臼处死，腹腔注射5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部，使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀，剪开腹部肌肉，吸管吸出洗涤液4 ml，加生理盐水至10 ml，置离心机以3 000 r·min-1离心15 min，取上清液在紫外光分光光度计上比色测定吸光度。
2.1.2 镇痛实验 筛选动物：采用热盘痛觉测试仪，自动控温在（55±0.5）℃，将小鼠置恒温盒内，以小鼠首次舔后足的时间为痛阈值，选择痛阈值在5～30 s的80只雌性小鼠为合格小鼠，为后续实验做准备。
将合格的小鼠按体质重随机分为8组，每组10只，分别为空白组、制马钱子粉组、肉桂69%组、肉桂86%组、肉桂91%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组、桂枝95.20%组。空白组灌胃等容量生理盐水，小鼠灌胃量为每10 g体质重给予0.3 mL的药液。连续灌胃给药5 d，每日1次，末次给药前与给药后30 min、60 min、120 min、180 min，测定小鼠痛阈值，超过60 s仍不舔后足的记60 s。
2.2 统计学方法 以上结果用SPSS l7.0统计软件进行统计分析，实验数据以表示，先做正态性检验和方差齐性检验。若满足条件，采用单因素方差分析，两两比较用LSD检验；若不满足条件则用非参数检验。各组吸光度值进行组间比较，t检验以P < 0.05为差异有统计学意义。
3 结 果
3.1 制马钱子与肉桂、桂枝配伍后的抗炎实验 见表1、表2。
表1 马钱子配伍肉桂对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 动物数
（只） 剂量
（mg·kg-1） 吸光度
（Abs）
空白组 10 — 0.475±0.140
制马钱子粉组 10 50 0.374±0.148
肉桂69%组 10 50 0.399±0.065
肉桂86%组 10 50 0.435±0.085
肉桂91%组 10 50 0.435±0.200
从表1可知，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍肉桂各比例组在抗炎方面虽然有一定作用，但差别均无统计学意义（P > 0.05）；与制马钱子粉组比较，配伍肉桂各比例组在抗炎方面亦差别无统计学意义（P > 0.05），说明制马钱子粉及配伍肉桂后有一定的抗炎作用，但作用并不理想。 表2 马钱子配伍桂枝对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 动物数
（只） 剂量
（mg·kg-1） 吸光度
（Abs）
空白组 10 — 0.475±0.140
制马钱子粉组 10 50 0.374±0.148
桂枝69%组 10 50 0.394±0.077
桂枝92.50%组 10 50 0.265±0.1261）2）
桂枝95.20%组 10 50 0.254±0.0421）2）
注 1）与空白组比较，P<0.01；2）与制马钱子粉组比较，P<0.05
从表2可知，与空白组比较，制马钱子粉组及桂枝87%组有一定的抗炎作用，但差别无统计学意义（P > 0.05）；而桂枝92.50%组与桂枝95.20%组对比，差别有统计学意义（P < 0.01）；与制马钱子粉组比较，桂枝92.50%组与桂枝95.20%组差异有统计学意义（P < 0.05）。说明制马钱子粉有一定的抗炎作用，但作用并不明显。配伍桂枝后能增强马钱子的抗炎作用，且随着桂枝含量的增加抗炎作用逐渐增强。
3.2 制马钱子与肉桂、桂枝配伍后的镇痛实验 见表3、表4。
从表3可以看出，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍肉桂各比例组在给药后各时间段均能提高小白鼠的痛阈值；而配伍肉桂各比例组与制马钱子粉组比较，差异均无统计学意义（P > 0.05），说明配伍肉桂不能明显增强马钱子的镇痛作用。
从表4可以看出，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍桂枝各比例组在给药后各时间段均能提高小白鼠的痛阈值，但配伍肉桂各比例组与制马钱子粉组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），说明配伍桂枝不能增强马钱子的镇痛作用。
4 讨 论
风湿病是临床及生活中常见而治疗上又很棘手的一种顽疾。使患者最痛苦的症状是肢体关节疼痛、重着、麻木、肿胀等，可见减轻疼痛、消除炎症是临床是亟待解决的问题。马钱子在传统医学就记载有祛风湿、止痹痛的作用，具有消肿散结、通络止痛的功效，善搜筋骨间风湿、开通经络、透达关节、止痛力强，为治疗风湿顽疾的特效药，并且现代医学[4]也证明马钱子总生物碱具有很强的抗炎、镇痛效果，因此马钱子在治疗风湿病方面是一种很理想的药物。
在前期实验证明，肉桂及桂枝均能降低马钱子毒性。研究其配伍后对马钱子抗炎、镇痛作用的影响，对马钱子运用于临床治疗风湿病具有指导意义。由于肉桂与桂枝中含有的桂皮醛有抗炎、镇痛的作用[5]，所以肉桂与桂枝应当有增强马钱子的药效作用。实验结果表明，配伍肉桂对马钱子的抗炎、镇痛作用没有明显增强；配伍桂枝对马钱子的镇痛作用无明显协同作用，但抗炎方面却有明显的增强作用。分析镇痛方面的原因，可能是两药中都含有的桂皮醛以及其他成分，虽然有镇痛作用，但却不明显，以致配伍马钱子也没有明显的增强其镇痛作用；分析抗炎方面的原因，有学者对63种药用植物的抗胰蛋白酶作用进行研究[6]，最后确定桂皮的热水提取物有很强的抗炎活性，并分离出其活性成分鞣酸样物质。而肉桂用的是粉末，桂枝用的是水煎液的提取物，所以只有配伍桂枝的混悬液中含有鞣酸样物质才能以起到抗炎作用，但具体作用机制还需进一步探讨。
5 参考文献
[1]娄高峰，娄玉钤，娄万峰.娄多峰论治痹病精华[M].天津：天津科技翻译出版公司，1994.
[2]李朝阳，娄玉钤，苗根旺，等.配伍肉桂、桂枝对马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎，2012，1（6）：28-30.
[3]白明，刘雅敏，娄玉钤.制马钱子粉急性毒性试验研究[J].风湿病与关节炎，2012，1（1）：41.
[4]王欣，李平.马钱子的药理作用[J].中医药临床杂志，2008，20（2）：188-189.
[5]马悦颖，李沧海，李兰芳，等.桂皮醛解热镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国临床药理学与治疗学，2006，11（12）：1336-1338.
[6]陈家源，牙启康，卢文杰，等.中药肉桂的研究概况[J].广西医学，2009，31（6）：872-874.
【关键词】 制马钱子；肉桂；桂枝；抗炎；镇痛；实验研究
风湿病是临床常见且在治疗上又很棘手的疑难病之一。全国名老中医药专家娄多峰教授总结多年治疗风湿病的临床经验[1]，指出风湿病的临床表现以肢体关节疼痛、重着、麻木、肿胀、屈伸不利、甚者关节变形或累及脏腑为主，疼痛与肿胀是临床常见症状，同时又给患者带来极大的痛苦，因此，治疗风湿病的炎症与疼痛是临床上亟待解决的问题。西医的抗炎镇痛药物对肝肾都有一定程度的损害，研制和开发具有镇痛、抗炎作用的中药是很有价值的。本实验以娄玉钤教授多年运用制马钱子治疗风湿病的临床经验为依据，且前期实验已经证明配伍肉桂及桂枝对制马钱子均有解毒作用[2]，来进一步研究配伍肉桂及桂枝对马钱子抗炎、镇痛疗效的影响，为临床运用马钱子配伍治疗风湿病提供现代药理学基础，并进一步丰富中医复方配伍理论。
1 实验材料
1.1 药 品 ①马钱子：经砂烫法炮制后的马钱子置超微粉碎机中，粉碎10 min，药物粉末过200目筛，用高效液相色谱仪测得士的宁含量为14.43 mg·g-1，
马钱子碱4.79 mg·g-1。②肉桂：取肉桂饮片，置超微粉碎机中，粉碎10 min，药物粉末过200目筛，即得。③桂枝：取桂枝饮片，置煎药机中，加10倍量水，煎煮1 h，浓缩，干燥，粉碎，药物粉末过200目筛，即得。1 g 浸膏粉相当于原生药1.41 g。
本实验所选取的制马钱子与肉桂、桂枝配伍比例是娄玉钤教授在长期的临床实践中，摸索出马钱子的用药规律，但是缺乏实验数据的证明。配伍比例组为肉桂69%组（肉桂占马钱子与肉桂混合物的百分比为69%，下同）、肉桂86%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组及桂枝95.20%。
以上药物均由河南风湿病医院购买提供，统一购于河南省药材公司，且经该院中药鉴定教研室鉴定；由河南中医学院药学院刘雅敏教授统一制备、打粉，密闭备用。
1.2 动 物 SPF级昆明小鼠，体质重18～22 g，抗炎实验雌雄各半，镇痛实验仅用雌鼠，由郑州大学动物实验中心提供，合格证号0008746，在河南中医学院动物实验中心统一喂养。
2 方 法
2.1 实验方法 分抗炎、镇痛两个单独的实验进行。制马钱子Dm（最小100%死亡量）为90.0 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）为50.0 mg·kg-1[3]。
2.1.1 抗炎实验 SPF级昆明种小白鼠80只，雌雄各半，按体质重随机分为8组，每组10只，分别为空白组、制马钱子粉组、肉桂69%组、肉桂86%组、肉桂91%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组、桂枝95.20%组。空白组灌等容量生理盐水，小鼠灌胃量为每10 g体质重给予0.3 mL药液。连续灌胃给药5 d，每日1次，末次灌胃给药30 min后，各小鼠尾静脉注射5 g·L-1依文思兰溶液0.1 ml∶10 g，
随即腹腔注射6 g·L-1的冰醋酸溶液0.1 ml∶10 g，20 min后颈椎脱臼处死，腹腔注射5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部，使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀，剪开腹部肌肉，吸管吸出洗涤液4 ml，加生理盐水至10 ml，置离心机以3 000 r·min-1离心15 min，取上清液在紫外光分光光度计上比色测定吸光度。
2.1.2 镇痛实验 筛选动物：采用热盘痛觉测试仪，自动控温在（55±0.5）℃，将小鼠置恒温盒内，以小鼠首次舔后足的时间为痛阈值，选择痛阈值在5～30 s的80只雌性小鼠为合格小鼠，为后续实验做准备。
将合格的小鼠按体质重随机分为8组，每组10只，分别为空白组、制马钱子粉组、肉桂69%组、肉桂86%组、肉桂91%组、桂枝87%组、桂枝92.50%组、桂枝95.20%组。空白组灌胃等容量生理盐水，小鼠灌胃量为每10 g体质重给予0.3 mL的药液。连续灌胃给药5 d，每日1次，末次给药前与给药后30 min、60 min、120 min、180 min，测定小鼠痛阈值，超过60 s仍不舔后足的记60 s。
2.2 统计学方法 以上结果用SPSS l7.0统计软件进行统计分析，实验数据以表示，先做正态性检验和方差齐性检验。若满足条件，采用单因素方差分析，两两比较用LSD检验；若不满足条件则用非参数检验。各组吸光度值进行组间比较，t检验以P < 0.05为差异有统计学意义。
3 结 果
3.1 制马钱子与肉桂、桂枝配伍后的抗炎实验 见表1、表2。
表1 马钱子配伍肉桂对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 动物数
（只） 剂量
（mg·kg-1） 吸光度
（Abs）
空白组 10 — 0.475±0.140
制马钱子粉组 10 50 0.374±0.148
肉桂69%组 10 50 0.399±0.065
肉桂86%组 10 50 0.435±0.085
肉桂91%组 10 50 0.435±0.200
从表1可知，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍肉桂各比例组在抗炎方面虽然有一定作用，但差别均无统计学意义（P > 0.05）；与制马钱子粉组比较，配伍肉桂各比例组在抗炎方面亦差别无统计学意义（P > 0.05），说明制马钱子粉及配伍肉桂后有一定的抗炎作用，但作用并不理想。 表2 马钱子配伍桂枝对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 动物数
（只） 剂量
（mg·kg-1） 吸光度
（Abs）
空白组 10 — 0.475±0.140
制马钱子粉组 10 50 0.374±0.148
桂枝69%组 10 50 0.394±0.077
桂枝92.50%组 10 50 0.265±0.1261）2）
桂枝95.20%组 10 50 0.254±0.0421）2）
注 1）与空白组比较，P<0.01；2）与制马钱子粉组比较，P<0.05
从表2可知，与空白组比较，制马钱子粉组及桂枝87%组有一定的抗炎作用，但差别无统计学意义（P > 0.05）；而桂枝92.50%组与桂枝95.20%组对比，差别有统计学意义（P < 0.01）；与制马钱子粉组比较，桂枝92.50%组与桂枝95.20%组差异有统计学意义（P < 0.05）。说明制马钱子粉有一定的抗炎作用，但作用并不明显。配伍桂枝后能增强马钱子的抗炎作用，且随着桂枝含量的增加抗炎作用逐渐增强。
3.2 制马钱子与肉桂、桂枝配伍后的镇痛实验 见表3、表4。
从表3可以看出，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍肉桂各比例组在给药后各时间段均能提高小白鼠的痛阈值；而配伍肉桂各比例组与制马钱子粉组比较，差异均无统计学意义（P > 0.05），说明配伍肉桂不能明显增强马钱子的镇痛作用。
从表4可以看出，与空白组比较，制马钱子粉组及配伍桂枝各比例组在给药后各时间段均能提高小白鼠的痛阈值，但配伍肉桂各比例组与制马钱子粉组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），说明配伍桂枝不能增强马钱子的镇痛作用。
4 讨 论
风湿病是临床及生活中常见而治疗上又很棘手的一种顽疾。使患者最痛苦的症状是肢体关节疼痛、重着、麻木、肿胀等，可见减轻疼痛、消除炎症是临床是亟待解决的问题。马钱子在传统医学就记载有祛风湿、止痹痛的作用，具有消肿散结、通络止痛的功效，善搜筋骨间风湿、开通经络、透达关节、止痛力强，为治疗风湿顽疾的特效药，并且现代医学[4]也证明马钱子总生物碱具有很强的抗炎、镇痛效果，因此马钱子在治疗风湿病方面是一种很理想的药物。
在前期实验证明，肉桂及桂枝均能降低马钱子毒性。研究其配伍后对马钱子抗炎、镇痛作用的影响，对马钱子运用于临床治疗风湿病具有指导意义。由于肉桂与桂枝中含有的桂皮醛有抗炎、镇痛的作用[5]，所以肉桂与桂枝应当有增强马钱子的药效作用。实验结果表明，配伍肉桂对马钱子的抗炎、镇痛作用没有明显增强；配伍桂枝对马钱子的镇痛作用无明显协同作用，但抗炎方面却有明显的增强作用。分析镇痛方面的原因，可能是两药中都含有的桂皮醛以及其他成分，虽然有镇痛作用，但却不明显，以致配伍马钱子也没有明显的增强其镇痛作用；分析抗炎方面的原因，有学者对63种药用植物的抗胰蛋白酶作用进行研究[6]，最后确定桂皮的热水提取物有很强的抗炎活性，并分离出其活性成分鞣酸样物质。而肉桂用的是粉末，桂枝用的是水煎液的提取物，所以只有配伍桂枝的混悬液中含有鞣酸样物质才能以起到抗炎作用，但具体作用机制还需进一步探讨。
5 参考文献
[1]娄高峰，娄玉钤，娄万峰.娄多峰论治痹病精华[M].天津：天津科技翻译出版公司，1994.
[2]李朝阳，娄玉钤，苗根旺，等.配伍肉桂、桂枝对马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎，2012，1（6）：28-30.
[3]白明，刘雅敏，娄玉钤.制马钱子粉急性毒性试验研究[J].风湿病与关节炎，2012，1（1）：41.
[4]王欣，李平.马钱子的药理作用[J].中医药临床杂志，2008，20（2）：188-189.
[5]马悦颖，李沧海，李兰芳，等.桂皮醛解热镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国临床药理学与治疗学，2006，11（12）：1336-1338.
[6]陈家源，牙启康，卢文杰，等.中药肉桂的研究概况[J].广西医学，2009，31（6）：872-874.