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目的:通过建立Friend型鼠白血病病毒(FLV)引起的BALB/C小鼠所致的免疫缺陷动物模型,选取脾指数、胸腺指数、T细胞亚群角度来研究益艾康胶囊提高免疫功能的机理,为中医药艾滋病实验研究奠定基本思路,为今后推广益艾康胶囊提供充分的实验室依据。 方法:①首先对从美国ATCC引进的FLV毒株进行病毒传代:BALB/C小鼠,每只腹腔注射0.5ml,14日后处死小鼠,剖取脾脏,制成脾悬液,离心,传代两次,经鼠脾适应后毒力增强,鼠脾适应株制备完成。②病毒滴度ID50测定:解冻先前制作的脾悬液,分别进行原液的101倍,102倍,103倍,104倍,105倍稀释。用以上6个浓度脾悬液腹腔注射,感染小鼠,每只0.5ml。正常组小鼠腹腔注射相等剂量的生理盐水。三周后,称量小鼠体重,处死小鼠。按照脾指数大于正常组小鼠脾指数的均数+3倍标准差为标准为阳性。按照按Reed和Muench氏法计算ID50。③实验1:益艾康胶囊对FLV小鼠脾指数、胸腺指数的影响。腹腔注射0.4mlx10-1FLV病毒原液攻毒后,随机分为FLV模型组、ATZ对照组组、唐草片对照组、益艾康胶囊大剂量组,益艾康胶囊中剂量组、益艾康胶囊小剂量组。攻毒当日开始灌胃口服给药益艾康大中小剂量组分别给予4g/kg/d,2g/kg/d,1g/kg/d剂量灌胃,模型组灌以等量生理盐水,ATZ组按200mg/kg体重灌胃,连续21d。无菌取脾,以电子天平精密称取其重量,以脾/胸腺重除以体重×100即为脾/胸腺指数。④实验2:益艾康胶囊对T细胞亚群的影响。动物的分组及模型复制方法同实验1,小鼠给药21天后,末次给药后1小时,眼球取血,以EDTA抗凝。每只小鼠取50ulEDTA抗凝血分别与CD4、CD3、CD44、CD62L以及CD8、CD3、CD44、CD62L均匀混合,室温下静置反应15min。各管中加人FACS溶红细胞液,充分混匀,室温静置反应12min后,1500rpm离心5min,弃除上清液,并于各试管中加入500μLPBS,重悬成单细胞悬液,用流式细胞仪检T细胞亚群,包括CD4T淋巴细胞、CD8T淋巴细胞、CD4/CD8比值、CD4T初始细胞亚群(CD62LhighCD44low)、CD4T记忆细胞亚群(CD62LlowCD44high)。CD8T初始细胞亚群(CD62LhighCD44low),CD8T记忆细胞亚群(CD62LlowCD44high) 结果: 1.益艾康胶囊对FLV所致免疫缺陷小鼠脾指数,胸腺指数的影响 脾重和脾指数结果显示:与模型组相比,益艾康组和唐草片组对脾大均有较好的抑制作用,但效果稍逊于AZT组,AZT组脾重接近正常组。AZT组能最小程度的减少脾指数。益艾康胶囊组和唐草片组也能减少脾指数,两者没有统计学意义。 胸腺重及胸腺指数结果显示:模型组胸腺重最小,胸腺受抑制明显。AZT组胸腺重量接近于正常对照组。益艾康组与唐草片组亦能增加胸腺重量,两者之间没有差异。AZT组能明显的改善胸腺指数,接近正常对照组。益艾康组和唐草片组增加胸腺指数方面没有差异。 2.益艾康胶囊对FLV所致免疫缺陷小鼠T淋巴细胞亚群的影响 CD4+T淋巴细胞:益艾康胶囊与模型对照组相比,具有升高CD4+T细胞的作用(P<0.05),益艾康各组升高CD4+T淋巴细胞作用和唐草片组之间无差异(P>0.05)。AZT组与模型组对比有显著的差异(P<0.01)。 CD8+T淋巴细胞:益艾康组与模型组相比并无明显的差异,和AZT之间也无差异,而唐草片组则与模型组有显著差异。唐草片有显著的升高CD8+T淋巴细胞的作用。 CD4/CD8的比值:益艾康大中剂量组和AZT组能升高CD4/CD8比值,但益艾康胶囊大中剂量组和AZT组相比仍有一定的差距。而唐草片CD4/CD8比值接近于模型组。 纯真T淋巴细胞亚群(CD44hiCD62lo)方面:益艾康胶囊对CD4T纯真细胞和模型组没有差异,而AZT却与益艾康作用相反,和模型组比有统计学意义,CD4T纯真亚群较高。唐草片组与益艾康胶囊没有统计学意义。同样CD8T纯真亚群结果和CD4T结果一致,益艾康胶囊和唐草片对纯真亚群没有影响,AZT则有显著的影响。 记忆T淋巴细胞亚群方面(CD44loCD62hi):益艾康胶囊对CD8和CD4T记忆细胞有着明显的效果,和模型组相比有显著的统计学意义,而AZT对记忆亚群和模型组相比没有统计学差异,唐草片组也能提高记忆亚群,但是效果不如益艾康胶囊组。 结论: 1.益艾康胶囊可以抑制FLV所致免疫缺陷小鼠的脾肿大,并降低脾指数,保护脾脏,效果好于唐草片但逊于AZT组。 2.益艾康可以增加FLV所致免疫缺陷小鼠胸腺重量和胸腺指数,效果与唐草片组无统计学差异,和AZT组仍有一定的差距。 3.益艾康囊可以升高FLV免疫缺陷小鼠CD4T和CD4/CD8比值,增强FLV小鼠免疫力。在提高CD4T淋巴细胞和CD4/CD8比值方面逊于AZT,与唐草片效果相近。在提高CD4/CD8比值方面要优于唐草片。 4.益艾康胶囊增强免疫的机理可能在于提高T淋巴细胞记忆细胞亚群。