C1QTNF6在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

来源 :右江民族医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yunkan
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目的:通过分析人类补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(The Complement C1q/tumor necrosis factor associated protein 6,C1QTNF6)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织以及癌旁组织中m RNA的表达情况,并检测正常人及口腔鳞状细胞癌患者血浆中C1QTNF6蛋白的表达情况,研究C1QTNF6与口腔鳞状细胞癌临床病理特性的关联及意义,寻找潜在的早期诊断OSCC的生物标志物,为OSCC的早期诊断及预后判断提供新的方向和思路。方法:(1)基于人体肿瘤基因组图谱(The cancer genome atlas,TCGA)数据库使用R软件(版本3.6.3)进行在泛癌以及口腔鳞状细胞癌中C1QTNF6的分析和可视化,并且制作C1QTNF6诊断依赖性受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),评估该因子对于口腔鳞状细胞癌的诊断效能。使用R软件筛选在口腔鳞状细胞癌中与C1QTNF6分子关联的差异基因列表,并进行GO/KEGG功能聚类分析以及基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)。应用单基因Logistic回归分析C1QTNF6与临床病理特征的关系,以及进行单因素/多因素Cox风险回归模型的构建,寻找影响OSCC患者预后的独立危险因素及保护因素,最后进行C1QTNF6与免疫细胞浸润的相关性分析。(2)选取自2020年7月至2021年12月之间,在右江民族医学院附属医院口腔颌面外科住院,同时经组织学病理活检结果提示为口腔鳞状细胞癌的病人血浆33例,正常健康对照组血浆15例,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)比较C1QTNF6在OSCC患者血浆及正常血浆中的表达情况。(3)选取自2019年1月至2021年12月期间,在右江民族医学院附属医院口腔颌面外科住院,并接受口腔鳞状细胞癌根治术治疗的口腔鳞癌患者39例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)法检测C1QTNF6 m RNA在OSCC癌组织及癌旁组织中的相对表达量。采用Pearson相关性分析研究了口腔鳞状细胞癌病人血浆中C1QTNF6蛋白的表达以及口腔鳞状细胞癌组织中C1QTNF6 m RNA表达的关系。(4)以上各组的研究数据均用SPSS25.0统计软件分析,C1QTNF6在鳞癌患者血浆及正常健康者血浆中的表达差异用两独立样本比较的秩和检验,C1QTNF6在癌组织及癌旁组织中的表达不同采用Wilcoxon符号秩和检验,并使用Fisher确切概率法分析C1QTNF6高低表达与口腔鳞状细胞癌患者临床及病理特征参数的关联关系,P<0.05具有统计意义。结果:(1)在TCGA数据库中的差异表达分析显示C1QTNF6在口腔鳞状细胞癌组织中的表达明显高于癌旁组织,而在单基因差异分析中提示,在满足|log2(FC)|>1且P<0.05的阈值下,有721个基因上调,916个基因下调。GO/KEGG富集分析提示C1QTNF6可能与蛋白质消化吸收、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路等生物学过程有关(P<0.05,FDR<0.25)。Logistic回归分析表明,C1QTNF6在口腔鳞状细胞癌中的高表达与口腔鳞状细胞癌患者是否有淋巴血管侵袭(OR=2.028,P=0.014)及组织病理分级(OR=2.558,P=0.004)有关。单因素/多因素分析发现淋巴血管侵袭(HR=2.312,P<0.001)、T分期(HR=2.124,P=0.003)是口腔鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素,而接受放射治疗(HR=0.418,P<0.001)、进行颈淋巴清扫术(HR=0.461,P=0.038)是OSCC患者预后的保护因素。ROC曲线下面积为0.958,推测C1QTNF6的表达对于区别口腔鳞状细胞癌和正常口腔组织具有较高准确性。另外,C1QTNF6还与口腔鳞状细胞癌中多种免疫浸润细胞呈显著的正相关,包括自然杀伤细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、Th1细胞、效应记忆性T细胞以及未成熟的树突状细胞。(2)口腔鳞癌患者血浆中C1QTNF6蛋白表达较正常健康者血浆中显著增高(P<0.001),C1QTNF6蛋白表达的ROC曲线下面积为0.933,提示C1QNF6的表达对于鉴别口腔鳞状细胞癌及正常组织有较高的能力。另外,本实验中39例口腔鳞癌组织中C1QTNF6相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),差异具有统计学意义。(3)C1QTNF6在不同性别、年龄、有无吸烟、有无饮酒、T分期、分化等级、有无淋巴结转移、有无淋巴血管侵袭及病理分期之间的表达的差异无统计学意义(P>0.05)。(4)单因素-多因素Cox回归分析,经分析后确定了本实验中39例口腔鳞状细胞癌患者的总生存期(Overall survival,OS)与其年龄、病理分期、T分期、有无淋巴结转移及有无淋巴血管侵袭均无明显关系,与组织病理分级(HR=5.194,P=0.014)及C1QTNF6的表达(HR=4.780,P=0.027)有关,差异具有统计学意义。生存曲线分析提示,C1QTNF6高表达的口腔鳞状细胞癌患者其无病生存期(Disease Free Survival,DFS)及总生存期(Overall Survival,OS)均较低表达患者短,39例口腔鳞状细胞癌患者ROC曲线下面积为0.748,对口腔鳞癌的诊断有一定的效能。(5)17例口腔鳞状细胞癌血浆中C1QTNF6蛋白的表达与口腔鳞状细胞癌组织中C1QTNF6 m RNA表达成正相关(r=0.686,P=0.002)。结论:(1)C1QTNF6在口腔鳞状细胞癌患者的血浆及口腔鳞状细胞癌组织中表达增高,可能是口腔鳞状细胞癌的一个潜在的诊断及预后标志物。(2)外周血C1QTNF6蛋白的检测可能可以作为诊断口腔鳞状细胞癌的一种辅助手段。(3)口腔鳞状细胞癌组织中C1QTNF6的表达与多种免疫细胞的浸润呈正相关,可能参与了肿瘤免疫的过程。
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