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母体糖皮质激素(Glucocorticoids,GCs)过度升高会导致胎盘发育不全,功能受阻,进而导致胎儿宫内生长受限,并通过胎儿代谢程序化影响成年后的健康。胎盘分泌的胰岛素样生长因子-1(Insulin like growth factor-1,IGF-1)可通过自分泌、旁分泌及内分泌的方式调节胎盘的生长和营养转运,从而影响胎儿的发育。有文献报道,GCs抑制胎盘细胞IGF-1的表达和分泌,但机制尚不明确。胎盘的滋养层由细胞体滋养层细胞和合胞体滋养层细胞两类细胞组成,细胞体滋养层细胞主要进行有丝分裂,参与胎盘的生长;合胞体滋养层细胞由细胞体滋养层细胞分化形成,其主要功能为激素分泌和营养转运。本实验采用地塞米松(Dexamethasone,Dex)处理两种滋养层细胞,研究GCs对这两种胎盘滋养层细胞IGF-1表达与分泌的影响及其机制,并分析IGF-1是否介导GCs对胎盘生长和营养转运功能的影响。1地塞米松通过GR介导的IGF-1转录调控影响BeWo细胞增殖本实验采用胎盘绒毛膜癌细胞系(BeWo)为细胞体滋养层模型,研究人工合成糖皮质激素类药物Dex对IGF-1表达的影响及其调控机制。结果表明10-7M Dex处理BeWo细胞24 h后,细胞活力显著下降(P<0.05),BrdU掺入指数显著降低(P<0.05)。通过流式细胞仪检测细胞周期发现,BeWo细胞停滞在G0/G1期。同时,Dex显著降低了 BeWo细胞总IGF-1及其变体的mRNA的表达(P<0.05),并且细胞培养液中IGF-1水平也显著降低(P<0.05)。Dex处理显著降低了糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)总蛋白水平(P<0.05),促进了 GR磷酸化(P<0.05)。免疫荧光定位显示Dex促进GR进入细胞核。GR拮抗剂(RU486)有效地阻断了 Dex对细胞增殖和IGF-1表达的影响。为了进一步研究GR调控IGF-1表达的机制,我们通过软件在IGF-1基因的5’侧翼序列中预测到两个GRE位点,进一步通过染色质免疫共沉淀(ChIP)实验,发现Dex显著(P<0.05)下调了 GR与GRE1的结合,而显著(P<0.05)上调了 GR与GRE 2位点的结合。此外,采用IGF-1与Dex共处理有效地逆转了 Dex抑制滋养层细胞增殖的作用(P<0.05)。由此证明,Dex通过GR介导的IGF-1转录调控影响细胞体滋养层细胞增殖。2地塞米松通过GR调控合胞体滋养层细胞IGF-1和SLC7A5表达实验采用Forskolin诱导分化的BeWo细胞作为合胞体滋养层细胞模型,用10-7MDex处理24h,发现氨基酸转运载体SLC7A5的表达显著下调(P<0.05)。同时,IGF-1mRNA及其变体(P<0.05)的表达和培养液中IGF-1水平(P<0.05)也显著降低。Dex处理显著降低了 GR总蛋白水平(P<0.05),促进了 GR磷酸化(P<0.05)。免疫荧光定位显示在分化后的BeWo细胞中GR主要分布在细胞核,Dex和RU486处理对GR的亚细胞定位无显著影响。RU486有效地阻断了Dex对IGF-1和SLC7A5表达的抑制。ChIP分析发现Dex处理显著降低了 GR与IGF1基因启动子区域GRE1位点的结合(P<0.05),但不影响GR与GRE2的结合。此外,IGF-1与Dex共处理并不能逆转Dex对SLC7A5表达的影响,推测IGF-1可能不参与Dex对合胞体滋养层细胞营养转运的调控。