牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)引起的一种人兽共患传染病,它严重危害人的健康和畜牧业的发展,且导致巨大的经济损失。因此,对牛结核病的防控显得格外的重要。然而,缺乏可用于检测结核杆菌的特应性靶标分子及用于研制有效疫苗的候选分子是结核病防治面临的棘手问题,因此,发掘这些重要分子就成了结核病防治研究的热点。分泌蛋白是目前研究较多的结核杆菌特异性抗原,本实验筛选出Mb1761c和Mb2277两个分泌蛋白,在利用生物信息学方法对其信号肽和疏水跨膜区进行分析的基础上,通过实验生物学方法,对其表达免疫原性进行了验证。本研究主要分为以下两个方面的内容:(1)牛分枝杆菌Mb1761c和Mb2277蛋白的免疫原性的初步研究。根据GenBank提供的Mb1761c和Mb2277的基因序列设计引物,通过PCR方法扩增出目的基因,构建重组表达质粒,原核诱导表达后,利用Western-Blot对表达产物的免疫原性进行验证。结果表明目的蛋白具有较强的免疫原性,从而为进一步研究其亚单位疫苗及ELISA检测方法提供了候选蛋白。(2)重组蛋白在ELISA检测方法中的初步应用研究。将筛选得到的两个具有较强免疫原性的蛋白分子Mb1761c和Mb2277作为抗原,分别进行ELISA实验。结果表明Mb2277的灵敏性较强。将两个蛋白按照不同比例混合作为包被抗原,结果显示将两种重组蛋白按1:1混合包被,ELISA的灵敏度高于单个抗原包被的。本研究筛选鉴定了分枝杆菌两个具有免疫原性的蛋白分子,为进一步建立结核杆菌的ELISA检测方法和研制新型疫苗奠定了基础。