【摘 要】
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[目的]筛选对松褐天牛成虫具有高致病力的白僵菌菌株,以期用于防治松褐天牛成虫.[方法]收集被病原真菌感染的松褐天牛幼虫,25℃条件下PDA培养基培养分离纯化病原真菌.使用25
【机 构】
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中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业和草原局森林保护学重点实验室 北京100091北京市植物园 北京市花卉园艺工程技术研究中心 北京100093;北京市植物园 北京市花卉园艺工程技术研究
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[目的]筛选对松褐天牛成虫具有高致病力的白僵菌菌株,以期用于防治松褐天牛成虫.[方法]收集被病原真菌感染的松褐天牛幼虫,25℃条件下PDA培养基培养分离纯化病原真菌.使用25℃、相对湿度60％、光周期16 L∶8D条件下羽化5～10天的健壮松褐天牛成虫,生物测定病原真菌致死效果.将PDA培养基上培养获得的病原真菌孢子,分别溶于0.05％的吐温80溶液中,配制成终浓度分别为1×106～3×106或者1×106～3×10 7个·mL-1的孢子悬浮液,0.05％的吐温80溶液作为空白对照.采用涂枝法和喷洒法处理松褐天牛成虫,以累计校正死亡率为指标评价菌株的致病力.折线图由R包“ggplot2”绘制.采用ITS1和ITS4扩增真菌保守序列,经连接转化后测序.采用软件muscle比对序列,MEGA软件中的最大似然法构建系统发育树.[结果]从感染的23头松褐天牛幼虫中共分离出23株白僵菌菌株,通过喷洒法初步筛选出18天累计校正死亡率在30％以上的6个菌株.选取B7和B92个产孢量大(14天,108·cm-2)的菌株,涂枝法进行毒力测试结果表明,B9菌株在12天的累计校正死亡率即可达到100％,而B7菌株在12天时的累计校正死亡率约为50％±10％,B9菌株的致死速率显著高于B7菌株.ITS扩增及测序结果表明与球孢白僵菌的同源性为99％.系统发育树结果也表明B9菌株与球孢白僵菌聚为同一分支上.结合形态、NCBI Blast比对结果和系统发育树共同确定B9菌株为球孢白僵菌.[结论]本研究得到对松褐天牛成虫高毒力的球孢白僵菌菌株,对于防治松褐天牛具有良好的应用前景,但实际应用价值需要进一步的田间试验进行确认.
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