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摘要：通过因素试验，研究了超声辅助提取何首乌中卵磷脂的工艺优化，确定最佳工艺条件为：乙醇浓度80%、提取时间40分钟、提取温度45℃，固液比1：4（g/mL），提取2次，在此条件下，何首乌卵磷脂收率为109.9（mg/100g）。
关键词：何首乌；卵磷脂；超声波；提取方法
*作者简介：：江尚飞（1979- ），男，讲师，主要研究方向：中药制剂。.
【中图分类号】R122.1【文献标识码】A【文章编号】1672-8602（2014）07-0292-01
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，具有养血滋阴、补肝肾、乌须发、强筋骨等功效。现代临床用于促进造血功能，提高机体免疫功能，降血脂，抗动脉粥样硬化，保肝，延缓衰老，影响内分泌功能，润肠通便等作用，物质基础主要为卵磷脂、蒽醌类、葡萄糖苷类等成分。其中所含的卵磷脂类是其重要的活性成分，具有抗衰老、降血脂、防治心血管疾病的作用；有研究发现卵磷脂能改进神经功能障碍及紊乱，恢复脑功能，增强记忆力等功能。为研究何首乌卵磷脂提取工艺，本文通过正交实验考察乙醇浓度、提取温度、提取时间、固液比、提取次数等因素对何首乌卵磷脂提取率的影响，优选出了何首乌卵磷脂的最佳提取工艺。
1仪器与试药
1.1仪器
SPD-10A型紫外检测器；HS3120型超声波提取仪（天津市恒奥科技发展有限公司）；AUX220型双量程分析天平（日本岛津）。
1.2试药
制何首乌购于重庆市慧远中药饮片有限公司；卵磷脂（贵州迪达生物有限公司，批号：8002-43-5）；无水乙醇分析纯，其他试剂均为分析纯。
2实验方法
2.1超声辅助何首乌卵粗粉提取根据卵磷脂不溶于丙酮的特点，在超声环境下先用丙酮处理何首乌，除去其中的水分、胆固醇以及脂肪等成分，然后用乙醇进行提取。提取液用旋转蒸发仪蒸发浓缩，用乙醚溶解提取，恒温蒸发乙醚后，丙酮脱色，过滤，蒸发丙酮，加入无水乙醇溶解，将样品液转移到25mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，即得样品溶液。
2.2标准曲线的绘制
2.2.1卵磷脂标准溶液配制：准确称取卵磷脂标准品0.0325g，置于25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配成卵磷脂含量为1.3mg/mL的标准液，待用。
2.2.2准确吸取卵磷脂标准溶液0.30、0.60、0.90、1.20、1.50、1.80、2.10、2.40、2.70mL于9个5mL容量瓶中，用无水乙醇定容，得到浓度分别为0.078、0.156、0.234、0.312、0.390、0.468、0.546、0.624、0.702mg/mL的卵磷脂溶液。在21lnm下分别测定上述卵磷脂溶液的吸光值，以卵磷脂溶液浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制C-A曲线，见图1。计算得回归方程为：A = 2.509C+0.2251 （R=0.9973），表明卵磷脂在此范围内呈良好的线性关系。
3结果与讨论
3.1乙醇浓度对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在温度为25℃，提取时间为20min，提取次数为2次，固液比（粗粉：溶剂）为l：2（g/mL）的条件下，考察乙醇浓度与收率的关系，结果见图2。卵磷脂收率随乙醇浓度的升高而增加，当乙醇浓度≥80%，其增加趋势不明显。考虑到乙醇回收，生产成本因素，乙醇浓度选择为80%。
图1 卵磷脂测定标准曲线 图2 乙醇浓度对卵磷脂收率的影响
3.2温度对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，提取时间为20 min，提取次数为2次，固液比（粗粉：溶剂）为1：2（g/mL）的条件下，考察温度对收率的影响，结果见图3。卵磷脂的收率随温度的升高而增加，45℃收率达到最高，为1.025（mg/g），以后收率逐渐下降。这可能是由于温度的升高，加速了卵磷脂的氧化分解，因此乙醇提取卵磷脂温度以45℃为最佳。
3.3超声时间对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，固液比为l：2（g/mL），提取次数为2次的条件下，考察超声时间对收率的影响，结果见图4。随着超声时间的延长，收率呈正增长趋势，时间越长收率越高，但趋势越来越缓，因此，提取时间以40 min为宜。
图3 温度对卵磷脂收率的影响 图4 提取时间对卵磷脂收率的影响
3.4固液比对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，提取时间为40 min，提取次数为2次的条件下，考察固液比对收率的影响，结果见图5。随着固液比的增加，卵磷脂的收率明显增加。这是因为增加提取溶剂用量能增加固液接触面积，提高溶质扩散速率，从而提高提取率。当固液比提高到1：6以后，收率增加幅度降低，综合收率和乙醇回收，固液比选用1：4（g/mL）较为合理。
3.5提取次数对卵磷脂收率的影响
准确称取3份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，提取时间为40 min，固液比为l：4（g/mL）的条件下，考察提取次数对收率的影响，结果见图6。提取次数越多，提取率越高，但随着次数的增多，单次的提取效率越低，而且随着提取次数增多杂质也相对增加，影响产品的纯度，给后续步骤造成麻烦，因此提取2次效果较好。
图5 固液比对卵磷脂收率的影响 图6 提取次数对卵磷脂收率的影响
4.结论
以何首乌粗粉为实验材料，以乙醇为溶剂，超声辅助提取何首乌卵磷脂的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%、提取时间40分钟、提取温度45℃，固液比1：4（g/mL），提取2次，在此条件下，何首乌卵磷脂收率为109.9（mg/100g）。
超声波提取提取温度低、提取率高、提取时间短，并且适应性广、提取药液杂质少、提取工艺成本低，目前广泛用于中药材和各种动、植物有效成分的提取，何首乌中卵磷脂应用超声波提取还很少，但作为何首乌卵磷脂实现高效、节能、环保式提取的现代高新技术手段，超声波辅助提取应用前景广阔。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典，I部[s].北京：中国医药科技出版社，2010：164
[2]赵声兰，赵荣华，解凤江，等.中草药.何首乌的提取工艺研究，2006，37（10）：1496-1499.
[3]陈占科，王淑美，陈静，等.制何首乌多糖的超声提取工艺.中国实验方剂学杂志，2011，17（19）：44-46.
[4]白研，葛发欢.超临界CO2流体萃取制首乌中卵磷脂成分的正交试验研究.中药材，26（10）：749-750.[5]周庆华，杨德强，张蕾，等.何首乌炮制过程中磷脂含量的测定.中医药学报，2011，39（5）：69-70.
关键词：何首乌；卵磷脂；超声波；提取方法
*作者简介：：江尚飞（1979- ），男，讲师，主要研究方向：中药制剂。.
【中图分类号】R122.1【文献标识码】A【文章编号】1672-8602（2014）07-0292-01
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，具有养血滋阴、补肝肾、乌须发、强筋骨等功效。现代临床用于促进造血功能，提高机体免疫功能，降血脂，抗动脉粥样硬化，保肝，延缓衰老，影响内分泌功能，润肠通便等作用，物质基础主要为卵磷脂、蒽醌类、葡萄糖苷类等成分。其中所含的卵磷脂类是其重要的活性成分，具有抗衰老、降血脂、防治心血管疾病的作用；有研究发现卵磷脂能改进神经功能障碍及紊乱，恢复脑功能，增强记忆力等功能。为研究何首乌卵磷脂提取工艺，本文通过正交实验考察乙醇浓度、提取温度、提取时间、固液比、提取次数等因素对何首乌卵磷脂提取率的影响，优选出了何首乌卵磷脂的最佳提取工艺。
1仪器与试药
1.1仪器
SPD-10A型紫外检测器；HS3120型超声波提取仪（天津市恒奥科技发展有限公司）；AUX220型双量程分析天平（日本岛津）。
1.2试药
制何首乌购于重庆市慧远中药饮片有限公司；卵磷脂（贵州迪达生物有限公司，批号：8002-43-5）；无水乙醇分析纯，其他试剂均为分析纯。
2实验方法
2.1超声辅助何首乌卵粗粉提取根据卵磷脂不溶于丙酮的特点，在超声环境下先用丙酮处理何首乌，除去其中的水分、胆固醇以及脂肪等成分，然后用乙醇进行提取。提取液用旋转蒸发仪蒸发浓缩，用乙醚溶解提取，恒温蒸发乙醚后，丙酮脱色，过滤，蒸发丙酮，加入无水乙醇溶解，将样品液转移到25mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，即得样品溶液。
2.2标准曲线的绘制
2.2.1卵磷脂标准溶液配制：准确称取卵磷脂标准品0.0325g，置于25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配成卵磷脂含量为1.3mg/mL的标准液，待用。
2.2.2准确吸取卵磷脂标准溶液0.30、0.60、0.90、1.20、1.50、1.80、2.10、2.40、2.70mL于9个5mL容量瓶中，用无水乙醇定容，得到浓度分别为0.078、0.156、0.234、0.312、0.390、0.468、0.546、0.624、0.702mg/mL的卵磷脂溶液。在21lnm下分别测定上述卵磷脂溶液的吸光值，以卵磷脂溶液浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制C-A曲线，见图1。计算得回归方程为：A = 2.509C+0.2251 （R=0.9973），表明卵磷脂在此范围内呈良好的线性关系。
3结果与讨论
3.1乙醇浓度对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在温度为25℃，提取时间为20min，提取次数为2次，固液比（粗粉：溶剂）为l：2（g/mL）的条件下，考察乙醇浓度与收率的关系，结果见图2。卵磷脂收率随乙醇浓度的升高而增加，当乙醇浓度≥80%，其增加趋势不明显。考虑到乙醇回收，生产成本因素，乙醇浓度选择为80%。
图1 卵磷脂测定标准曲线 图2 乙醇浓度对卵磷脂收率的影响
3.2温度对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，提取时间为20 min，提取次数为2次，固液比（粗粉：溶剂）为1：2（g/mL）的条件下，考察温度对收率的影响，结果见图3。卵磷脂的收率随温度的升高而增加，45℃收率达到最高，为1.025（mg/g），以后收率逐渐下降。这可能是由于温度的升高，加速了卵磷脂的氧化分解，因此乙醇提取卵磷脂温度以45℃为最佳。
3.3超声时间对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，固液比为l：2（g/mL），提取次数为2次的条件下，考察超声时间对收率的影响，结果见图4。随着超声时间的延长，收率呈正增长趋势，时间越长收率越高，但趋势越来越缓，因此，提取时间以40 min为宜。
图3 温度对卵磷脂收率的影响 图4 提取时间对卵磷脂收率的影响
3.4固液比对卵磷脂收率的影响
准确称取5份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，提取时间为40 min，提取次数为2次的条件下，考察固液比对收率的影响，结果见图5。随着固液比的增加，卵磷脂的收率明显增加。这是因为增加提取溶剂用量能增加固液接触面积，提高溶质扩散速率，从而提高提取率。当固液比提高到1：6以后，收率增加幅度降低，综合收率和乙醇回收，固液比选用1：4（g/mL）较为合理。
3.5提取次数对卵磷脂收率的影响
准确称取3份样品，在乙醇浓度为80%，温度为45℃，提取时间为40 min，固液比为l：4（g/mL）的条件下，考察提取次数对收率的影响，结果见图6。提取次数越多，提取率越高，但随着次数的增多，单次的提取效率越低，而且随着提取次数增多杂质也相对增加，影响产品的纯度，给后续步骤造成麻烦，因此提取2次效果较好。
图5 固液比对卵磷脂收率的影响 图6 提取次数对卵磷脂收率的影响
4.结论
以何首乌粗粉为实验材料，以乙醇为溶剂，超声辅助提取何首乌卵磷脂的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%、提取时间40分钟、提取温度45℃，固液比1：4（g/mL），提取2次，在此条件下，何首乌卵磷脂收率为109.9（mg/100g）。
超声波提取提取温度低、提取率高、提取时间短，并且适应性广、提取药液杂质少、提取工艺成本低，目前广泛用于中药材和各种动、植物有效成分的提取，何首乌中卵磷脂应用超声波提取还很少，但作为何首乌卵磷脂实现高效、节能、环保式提取的现代高新技术手段，超声波辅助提取应用前景广阔。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典，I部[s].北京：中国医药科技出版社，2010：164
[2]赵声兰，赵荣华，解凤江，等.中草药.何首乌的提取工艺研究，2006，37（10）：1496-1499.
[3]陈占科，王淑美，陈静，等.制何首乌多糖的超声提取工艺.中国实验方剂学杂志，2011，17（19）：44-46.
[4]白研，葛发欢.超临界CO2流体萃取制首乌中卵磷脂成分的正交试验研究.中药材，26（10）：749-750.[5]周庆华，杨德强，张蕾，等.何首乌炮制过程中磷脂含量的测定.中医药学报，2011，39（5）：69-70.