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【摘 要】 目的:分析化学发光法(微粒子酶免法)与酶联免疫吸附实验(ELISA)及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原的差异性。方法:利用雅培i2000化学发光分析仪测定病人标本,记录乙肝表面抗原的定量结果,将同样的标本用酶联免疫吸附实验及胶体金检测,记录检测结果,经统计学处理,对三种方法的测定结果进行比较。结果:三种方法测定乙肝表面抗原的结果存在差异,化学发光法的阳性检出率较ELISA法及胶体金免疫沉析法高。结论:对ELISA法及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原处于临界状态的标本,应使用化学发光法检测,以提高结果的准确性,更好的为临床提供诊断依据。
【关键词】 乙肝表面抗原;微粒子酶免法;ELISA;胶体金免疫沉析法
近年来,随着医学检验技术的发展,乙肝表面抗原的检测已成为住院病人的常规项目检查,其操作方法越来越简便、快速、准确,大大提高了实验室的工作效率,也为临床诊断与治疗提供了可靠的依据。但是,由于乙肝表面抗原的检测方法多,并且各种方法的检测原理不尽相同,敏感性与特异性也存在差异,由于多数方法都是定性或半定量,检测结果不容易判断,特别是处于临界状态的标本,不同方法间存在着较大差异,因此,需要在不同方法间寻找一个相关性,以提高检测结果的准确性。目前,乙肝表面抗原的检测方法主要有:酶联免疫吸附实验(ELISA)、固相放射免疫法(SPRIA)、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法,各种方法对乙肝表面抗原的检测敏感性和特异性有较大差别,因此,为了保证不同方法检测结果的一致性,更好的服务于临床,我们选择了100份住院病人标本,使用化学发光、ELISA及胶体金免疫沉析法分别测定,现将结果报告如下:
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本的来源:收集100例住院病人标本。
1.1.2 仪器及试剂:美国雅培i2000全自动化学发光仪、北京普朗酶标仪、洗板机、美国雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂、厦门英科新创乙肝表面抗原诊断试剂盒、胶体金试剂盒、真空采血管、37℃恒温水浴箱。
1.2 方法
1.2.1 化学发光检测:采用病人血清标本,用雅培i2000化学发光仪检测。操作中使用雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂,每日用原装进口质控全血严格进行质量控制。在采血后2小时内完成操作。记录其阴性及阳性结果。
1.2.2 手工法(ELISA):
1.2.2.1 选择用美国雅培i2000全自动化学发光仪检测的病人标本100例。
1.2.2.2 立即用手工法(ELISA)进行检测(使用厦门英科新创乙肝表面抗原诊断试剂盒,严格依照其使用说明书操作)。使用北京普朗酶标仪进行测定,记录其阴性及阳性检测结果。
1.2.3 胶体金免疫沉析法:将以上100例标本使用胶体金法严格按照操作说明书进行测定,记录其阴性及阳性检测结果。
1.2.4 将上述三种方法的检测结果进行比较,分别计算其阳性率,进行比较。
2 结果
2.1 对化学发光仪、ELISA检测结果以及胶体免疫沉析法的检测结果进行比较,化学发光法与ELISA法比较(P<0.05)。化学发光法与胶体金免疫沉析法比较(P<0.05)见表1。所以化学发光仪的阳性率明显高于ELISA及胶体金检测结果:
2.2 对乙肝表面抗原阳性检测率,化学发光法(微粒子酶免法)的敏感性较ELISA及胶体金免疫沉析法高
3 讨论
目前,乙肝表面抗原的检测方法有许多,其广泛应用于临床的主要有:酶联免疫吸附实验(ELISA)技术、固相放射免疫法(SPRIA)、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法。
20世纪70年代将ELISA方法开始引入至国内,其方法简便、廉价、适合一般实验室推广,该法常利用底物循环、酶联级放大、生物素-亲和素、微颗粒体系等放大技术来提高灵敏度,它采用单克隆抗-HBS包被反应板,加入待测标本,同时加入多克隆抗-HBS-HRP,当标本中存在表面抗原时,该表面抗原与包被的表面抗体结合,并与抗-HBS-HRP结合形成抗-HBS-HBsAg-抗-HBS-HRP复合物,然后加入TMB底物,产生显色反应,反之则无显色反应。其发展迅速,很快覆盖了医学检验的诸多领域。双抗体夹心法是其中的代表。单克隆抗体的加人增加了检测的特异性,用辣根过氧化物酶标记链亲合素(替代卵亲合素以降低本底)与生物素标记的一抗(单克隆抗体)联用构成了高特异性、高敏感度的放大系统,在临床检测中构成了一道独特的风景线。E11SA以灵敏度高、特异性强、重复好为突出优点,对HBsAg的检测灵敏度可达0.5ng/ml[1]。目前国内成熟的ELISA法检测乙型肝炎试剂,已被卫生部临床检验中心作为标准,与美国ABBOTT试剂在灵敏度、特异性上都非常接近,所以ELISA被广泛应用于肝炎、HIV和HCV等各种免疫学检测,其最大优势在于该法避免了对环境和人体的危害;操作简便并且试剂有效期较长,同时也由于无放射性污染逐步取代了一些放射免疫方法。
微粒子酶免法(MEIA)是近年来新发展起来的一种新的抗原抗体检测技术,该方法对HBsAg检测灵敏度为0.17~0.2 ng/ml。该方法利用微粒内因子与待测物形成微粒内因子复合物后,与碱性磷酸酶共扼化合物结合成微粒内因子共扼复合物,再与底物反应生成带荧光的产物而被测定。临床上用雅培 AXSYM的 MEIA法测定乙肝病毒血清学标志物是公认参考法。其特点是:全自动,操作时环境不易被污染,但由于仪器和试剂成本高,在基层医院尚不能普及。
胶体金免疲层析法是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术,该法所用试剂全部为干试剂,多个试剂被结合在一个约6mmX70mm的塑料板条上,试纸条两端附有吸水材料,成为单一试剂条,实验过程短,是“床边检验”的主要方法之一。它用胶体金标记抗原、抗体后以层析方法进行检测,突出优点为快速、试剂便于保存、检测不需要特殊设备,并可以单份检测[2、3],适合急诊检测。但灵敏度和特异性稍差,比较适合用于基层医疗单位和标本初筛。目前已有成熟的胶体金试纸条如HCG金标纸条广泛应用于临床检测。在乙型肝炎重要标志物之一的HBsAg检测中,国外较好的金标试纸的检测灵敏度已接近ELISA,国内也有较成熟的胶体金试纸条被广泛应用,国产的HBsAg胶体试纸条检测灵敏度已达到1ng/ml[4],但与国外产品相比仍存在一定差距有待于进一步提高[3]。若能进一步提高检测灵敏度和特异性,实现检测多元化,进行定量和半定量检测,胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领域。
我们比较了雅培i2000化学发光仪和ELISA及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原的结果。三种方法中化学发光法的敏感性最高,被认为是乙肝表面抗原测定的参考方法。但试剂成本高,在基层医院尚不能普及。一般认为,ELISA的敏感性较胶体沉析法高,但本次研究中并没有体现。ELISA虽然敏感性较胶体金法高,由于是半定量方法,在阴阳性结果的判断上存在一定的误差,易造成漏检和假阳性。由于其检测成本低,可以推广使用。胶体金沉析法操作方便,整个检测过程耗时短,适用于其他方法检测阳性结果的复查。
综上所述,化学发光法的敏感性都较ELISA及胶体金免疫沉析法高,能检测出较微量的乙肝表面抗原,有助于临床发现早期病例,在有条件的情况下,适用于临床标本的检测。ELISA敏感性理论上较胶体金法约高,并且检测成本低,适用于小型医疗机构的普查使用;胶体金沉析法操作方便,检测用时短,无需特殊设备并且可单份检查,适用于临床急诊标本和对临床检测阳性的标本复查确认。
参考文献
[1]王浩丹,周申.生物医学标记示踪技术[M].北京:人民卫生出版牡,1995.99.
[2]王培之,徐克沂,皮国华.胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用[J].中华检验医学杂志.2000,23(5) :30.
[3]曾章新,刘文星,朱忠勇,等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价[J].中华医学检验杂志,1999,22(6):327.
[4]周继文,戎广亚,扬守纯,等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原[J].中华医学检验杂志,1998,21(1):30.
[5]Chen RW, Piiparinen H, Seppsmen M, et al. Real-time PCR for de-tectian and quantitation of hepatitis B virus DNA [J].J Med Vim,2001,65(2):250-256.
[6]郭红亮.酶联免疫一步法试剂检测乙型肝炎表面抗原的钩状效应及其对策[J].实用全科医学,2003,1(1):72-73.
【关键词】 乙肝表面抗原;微粒子酶免法;ELISA;胶体金免疫沉析法
近年来,随着医学检验技术的发展,乙肝表面抗原的检测已成为住院病人的常规项目检查,其操作方法越来越简便、快速、准确,大大提高了实验室的工作效率,也为临床诊断与治疗提供了可靠的依据。但是,由于乙肝表面抗原的检测方法多,并且各种方法的检测原理不尽相同,敏感性与特异性也存在差异,由于多数方法都是定性或半定量,检测结果不容易判断,特别是处于临界状态的标本,不同方法间存在着较大差异,因此,需要在不同方法间寻找一个相关性,以提高检测结果的准确性。目前,乙肝表面抗原的检测方法主要有:酶联免疫吸附实验(ELISA)、固相放射免疫法(SPRIA)、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法,各种方法对乙肝表面抗原的检测敏感性和特异性有较大差别,因此,为了保证不同方法检测结果的一致性,更好的服务于临床,我们选择了100份住院病人标本,使用化学发光、ELISA及胶体金免疫沉析法分别测定,现将结果报告如下:
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本的来源:收集100例住院病人标本。
1.1.2 仪器及试剂:美国雅培i2000全自动化学发光仪、北京普朗酶标仪、洗板机、美国雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂、厦门英科新创乙肝表面抗原诊断试剂盒、胶体金试剂盒、真空采血管、37℃恒温水浴箱。
1.2 方法
1.2.1 化学发光检测:采用病人血清标本,用雅培i2000化学发光仪检测。操作中使用雅培i2000全自动化学发光仪配套试剂,每日用原装进口质控全血严格进行质量控制。在采血后2小时内完成操作。记录其阴性及阳性结果。
1.2.2 手工法(ELISA):
1.2.2.1 选择用美国雅培i2000全自动化学发光仪检测的病人标本100例。
1.2.2.2 立即用手工法(ELISA)进行检测(使用厦门英科新创乙肝表面抗原诊断试剂盒,严格依照其使用说明书操作)。使用北京普朗酶标仪进行测定,记录其阴性及阳性检测结果。
1.2.3 胶体金免疫沉析法:将以上100例标本使用胶体金法严格按照操作说明书进行测定,记录其阴性及阳性检测结果。
1.2.4 将上述三种方法的检测结果进行比较,分别计算其阳性率,进行比较。
2 结果
2.1 对化学发光仪、ELISA检测结果以及胶体免疫沉析法的检测结果进行比较,化学发光法与ELISA法比较(P<0.05)。化学发光法与胶体金免疫沉析法比较(P<0.05)见表1。所以化学发光仪的阳性率明显高于ELISA及胶体金检测结果:
2.2 对乙肝表面抗原阳性检测率,化学发光法(微粒子酶免法)的敏感性较ELISA及胶体金免疫沉析法高
3 讨论
目前,乙肝表面抗原的检测方法有许多,其广泛应用于临床的主要有:酶联免疫吸附实验(ELISA)技术、固相放射免疫法(SPRIA)、免疫荧光技术、微粒子酶免法及胶体金免疫沉析法。
20世纪70年代将ELISA方法开始引入至国内,其方法简便、廉价、适合一般实验室推广,该法常利用底物循环、酶联级放大、生物素-亲和素、微颗粒体系等放大技术来提高灵敏度,它采用单克隆抗-HBS包被反应板,加入待测标本,同时加入多克隆抗-HBS-HRP,当标本中存在表面抗原时,该表面抗原与包被的表面抗体结合,并与抗-HBS-HRP结合形成抗-HBS-HBsAg-抗-HBS-HRP复合物,然后加入TMB底物,产生显色反应,反之则无显色反应。其发展迅速,很快覆盖了医学检验的诸多领域。双抗体夹心法是其中的代表。单克隆抗体的加人增加了检测的特异性,用辣根过氧化物酶标记链亲合素(替代卵亲合素以降低本底)与生物素标记的一抗(单克隆抗体)联用构成了高特异性、高敏感度的放大系统,在临床检测中构成了一道独特的风景线。E11SA以灵敏度高、特异性强、重复好为突出优点,对HBsAg的检测灵敏度可达0.5ng/ml[1]。目前国内成熟的ELISA法检测乙型肝炎试剂,已被卫生部临床检验中心作为标准,与美国ABBOTT试剂在灵敏度、特异性上都非常接近,所以ELISA被广泛应用于肝炎、HIV和HCV等各种免疫学检测,其最大优势在于该法避免了对环境和人体的危害;操作简便并且试剂有效期较长,同时也由于无放射性污染逐步取代了一些放射免疫方法。
微粒子酶免法(MEIA)是近年来新发展起来的一种新的抗原抗体检测技术,该方法对HBsAg检测灵敏度为0.17~0.2 ng/ml。该方法利用微粒内因子与待测物形成微粒内因子复合物后,与碱性磷酸酶共扼化合物结合成微粒内因子共扼复合物,再与底物反应生成带荧光的产物而被测定。临床上用雅培 AXSYM的 MEIA法测定乙肝病毒血清学标志物是公认参考法。其特点是:全自动,操作时环境不易被污染,但由于仪器和试剂成本高,在基层医院尚不能普及。
胶体金免疲层析法是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术,该法所用试剂全部为干试剂,多个试剂被结合在一个约6mmX70mm的塑料板条上,试纸条两端附有吸水材料,成为单一试剂条,实验过程短,是“床边检验”的主要方法之一。它用胶体金标记抗原、抗体后以层析方法进行检测,突出优点为快速、试剂便于保存、检测不需要特殊设备,并可以单份检测[2、3],适合急诊检测。但灵敏度和特异性稍差,比较适合用于基层医疗单位和标本初筛。目前已有成熟的胶体金试纸条如HCG金标纸条广泛应用于临床检测。在乙型肝炎重要标志物之一的HBsAg检测中,国外较好的金标试纸的检测灵敏度已接近ELISA,国内也有较成熟的胶体金试纸条被广泛应用,国产的HBsAg胶体试纸条检测灵敏度已达到1ng/ml[4],但与国外产品相比仍存在一定差距有待于进一步提高[3]。若能进一步提高检测灵敏度和特异性,实现检测多元化,进行定量和半定量检测,胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领域。
我们比较了雅培i2000化学发光仪和ELISA及胶体金免疫沉析法检测乙肝表面抗原的结果。三种方法中化学发光法的敏感性最高,被认为是乙肝表面抗原测定的参考方法。但试剂成本高,在基层医院尚不能普及。一般认为,ELISA的敏感性较胶体沉析法高,但本次研究中并没有体现。ELISA虽然敏感性较胶体金法高,由于是半定量方法,在阴阳性结果的判断上存在一定的误差,易造成漏检和假阳性。由于其检测成本低,可以推广使用。胶体金沉析法操作方便,整个检测过程耗时短,适用于其他方法检测阳性结果的复查。
综上所述,化学发光法的敏感性都较ELISA及胶体金免疫沉析法高,能检测出较微量的乙肝表面抗原,有助于临床发现早期病例,在有条件的情况下,适用于临床标本的检测。ELISA敏感性理论上较胶体金法约高,并且检测成本低,适用于小型医疗机构的普查使用;胶体金沉析法操作方便,检测用时短,无需特殊设备并且可单份检查,适用于临床急诊标本和对临床检测阳性的标本复查确认。
参考文献
[1]王浩丹,周申.生物医学标记示踪技术[M].北京:人民卫生出版牡,1995.99.
[2]王培之,徐克沂,皮国华.胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用[J].中华检验医学杂志.2000,23(5) :30.
[3]曾章新,刘文星,朱忠勇,等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价[J].中华医学检验杂志,1999,22(6):327.
[4]周继文,戎广亚,扬守纯,等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原[J].中华医学检验杂志,1998,21(1):30.
[5]Chen RW, Piiparinen H, Seppsmen M, et al. Real-time PCR for de-tectian and quantitation of hepatitis B virus DNA [J].J Med Vim,2001,65(2):250-256.
[6]郭红亮.酶联免疫一步法试剂检测乙型肝炎表面抗原的钩状效应及其对策[J].实用全科医学,2003,1(1):72-73.