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副溶血弧菌是重要的食源性致病菌,由该菌引发的疾病呈现逐年增涨的趋势。本文以副溶血弧菌为研究对象,调查了锦州笔架山海岸水产品中副溶血弧菌的污染状况和分离株中毒力基因的携带情况,建立了副溶血弧菌巢式PCR快速检验方法,为副溶血弧菌的快速检测提供了一种新的思路和借鉴。应用本方法与传统的GB/T 4789.7-2008方法进行了比较,结果表明,本方法与国家标准检测方法结果一致,但检测时间比国家标准检测法更具有优势。本文主要结论如下:1.从锦州笔架山海岸随机采集的319份不同品种水产样品,应用16S rRNA法与传统GB/T 4789.7-2008法检测出副溶血弧菌样品124份,总检出率为29%,这说明锦州笔架山海岸水产品的副溶血弧菌污染较为严重。副溶血弧菌对水产品的污染应该引起水产养殖户、专业技术人员和消费者的足够重视,采取必要的措施预防食源性疾病的爆发和流行。2.对从水产品分离出的124株副溶血弧菌,进行毒力相关基因检测,结果显示,携带tdh基因的菌株为2株,携带率为1.6%。携带tdh基因的菌株在神奈川溶血试验中均表现出β溶血现象。携带trh毒力基因的菌株为2株,其携带率为1.6%,且在尿素酶试验中均表现为尿素酶阳性。3.本文通过优化巢式PCR反应体系中DNA、引物、Mg2+、dNTPs、r Taq DNA聚合酶添加量和退火温度,最终确定了巢式PCR反应体系和反应条件。本方法可以在4h内完成,大大节约了检测时间。该反应体系以溶藻弧菌、创伤弧菌、大肠杆菌、地衣芽孢杆菌、鼠李糖沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的基因组DNA为模板进行扩增,均无目的条带,说明巢式PCR方法具有良好的特异性。敏感性试验结果显示,本方法对副溶血弧菌纯培养物的检测限为6.62cfu/mL、对DNA的检测限为200fg。人工污染试验表明,起始副溶血弧菌菌液浓度为2.57cfu/mL时,人工增菌2h即可检出,说明本巢式PCR方法具有较高的敏感性。巢式PCR法检验水产品中分离出的副溶血弧菌与传统国标法结果相符,因此,可将本文建立的巢式PCR法作为检验水产品中副溶血弧菌的一种参考方法。