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摘要：目的：探讨ELISA法检测沙眼衣原体感染检测的作用，从而为建立快速诊断沙眼衣原体的方法奠定基础。方法：选择2009年3月至2012年3月至我院就治的女性不孕患者101例设为观察组，采用ELISA法检测沙眼衣原体感染。并应用金标免疫斑点实验作为对照。结果：2种不同的方法对101份不孕妇女的血清样本进行检测，检测率分别为17.8%及9.9%，特异性和灵敏性明显优于金标法，差异具有统计学意义（p＜0.05）。结论：ELISA比金标试验更具有客观性，适合检测沙眼衣原体抗体，特别是大样本资料时，因此，ELISA试验可能是检测衣原体更好的方法。
关键词：ELISA；不孕；沙眼衣原体
沙眼衣原体是世界上常见的性传播的感染细菌，女性人群中，高达80%的沙眼衣原体感染呈隐形感染[1，]。失去治疗机会，结果继发慢性感染，留下附件周围粘连和输卵管闭塞等后遗症[2]。而输卵管闭塞是引起不孕的原因之一，在发达国家中，10%～30%的不孕与输卵管闭塞有关，在发展中国家，高达85%[3]。因此输卵管炎症导致的不孕症与隐形沙眼衣原体感染息息相关，因此，快速、准确的检测沙眼衣原体是非常有必要的。本研究试图运用ELISA试验对不孕症妇女血清中沙眼衣原体IgG抗体进行检测，为建立快速诊断沙眼衣原体的方法奠定基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2009年3月至2012年3月至我院就治的女性不孕患者101例设为观察组，年龄22～37岁；其中原发不孕51例，继发不孕50例；经检查证实无生殖系统发育异常；配偶无生殖功能异常。同时随机选择同期在我院体检的180例健康已婚育龄女性为对照组，年龄为20～36岁。
1.2 病例标准观察组：①未采取避孕措施≥1年。②证实无先天性生殖系统异常、无排卵障碍、无子宫内膜异位症、无生殖系统结核。③未行盆腔手术导致盆腔脏器粘连。④配偶无生殖功能异常。对照组：以上各项正常、有正常妊娠史、无生殖系统感染及病理妊娠史。
1.3 方法 血清标本可按常规方法采集，将磷酸盐缓冲液稀释的血清加入到市售的沙眼衣原体ELISA 96孔板中37℃中孵育2h。洗版5次后，加入辣根过氧酶标记IgG二抗，在37℃中孵育30min。洗板后加入四甲基联苯胺显色剂。15分钟后终止反应，且用分光光度计在450nm处读取吸光度。根据厂家说明书判断结果。并应用金标免疫斑点实验作为对照
1.4 统计学处理 所得数据均由SPSS13.0软件统计包进行统计学处理，两组计数资料或疗效比较采用χ2检验，组间对比采用t 检验，其中以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 检测结果比较 2种不同的方法对101份不孕妇女的血清样本进行检测，检测
率分别为17.8%及9.9%，特异性和灵敏性明显优于金标法，差异具有统计学意义（p＜0.05）结果见表1。
表1ELISA和与金标法检测结果比较
金标法 ELISA法 合计
阳性 阴性
阳性 7 3 10
阴性 11 80 91
合计 18 83 101
表2ELISA法与金标法效果比较
阳性率（%） 特异性（%） 灵敏度（%）
ELISA 17.8 98.8 93.5
金标法 9.9 86.4 87.8
2．2可靠性与稳定性试验 用ELISA法对其进行可靠性试验，分3组检测出平均批间变异系数（CV）为 5.46%，分3d检测出平均批内CV为 6.78%；对其进行稳定性试验，检测出平均批间 CV为5.63%，说明该方法的具有较好的可靠性和重复性。
3.讨论
沙眼衣原体感染是一种常见病、多发病，呈全球性分布，可能半数以上世界人口曾受感染，每年发生5千万例新感染，每年100万人死亡[4]。约世界人口的5%为慢性携带者，由此可见，我国沙眼衣原体感染状况是十分严峻[5]。总之，在检测沙眼衣原体感染时要注意假阳性和假阴性结果的出现，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。也不能出现假阴性结果，以利于患者的早发现、早诊断、早治疗，采取必要的防护措施，降低我们的沙眼衣原体感染率。
我们的研究表明，对于检测沙眼衣原体抗体，ELISA试验效果好于金标实验。且ELISA 试验操作更简单。价格更低，比金标试验更具有客观性，对于检测沙眼衣原体抗体，特别是大样本资料时，因此，ELISA试验可能是检测衣原体更好的方法。
ELISA法特异性强，敏感性高，操作快速简便，因而是免疫学检验中最为常用的方法[6]，也是我们基层医院检验科免疫学检验的主要技术手段。全程质量控制很重要，我们应该注意以下几个方面：①试剂仪器：优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。②时间和温度在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间。③洗涤：洗涤在EL ISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。④显色和结果判读：显色后一定要在规定时间内进行比色。判读结果不能仅用目测，一定要用酶标仪测定，上酶标仪要注意板条各孔中比色液体积的一致，否则会产生误差。
参考文献：
[1]Muvunyi CM，Claeys L，De Sutter T，De Sutter P，Temmerman M，Van Renterghem L，Claeys G，Padalko E.Comparison of four serological assays for the diagnosis of Chlamydia trachomatis in subfertile women.J Infect Dev Ctries.2012；6（5）：396-402.
[2]Muvunyi CM，Dhont N，Verhelst R，Temmerman M，Claeys G，Padalko E.Chlamydia trachomatis infection in fertile and subfertile women in Rwanda：prevalence and diagnostic significance of IgG and IgA antibodies testing.Hum Reprod.2011；26（12）：3319-3326.
关键词：ELISA；不孕；沙眼衣原体
沙眼衣原体是世界上常见的性传播的感染细菌，女性人群中，高达80%的沙眼衣原体感染呈隐形感染[1，]。失去治疗机会，结果继发慢性感染，留下附件周围粘连和输卵管闭塞等后遗症[2]。而输卵管闭塞是引起不孕的原因之一，在发达国家中，10%～30%的不孕与输卵管闭塞有关，在发展中国家，高达85%[3]。因此输卵管炎症导致的不孕症与隐形沙眼衣原体感染息息相关，因此，快速、准确的检测沙眼衣原体是非常有必要的。本研究试图运用ELISA试验对不孕症妇女血清中沙眼衣原体IgG抗体进行检测，为建立快速诊断沙眼衣原体的方法奠定基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2009年3月至2012年3月至我院就治的女性不孕患者101例设为观察组，年龄22～37岁；其中原发不孕51例，继发不孕50例；经检查证实无生殖系统发育异常；配偶无生殖功能异常。同时随机选择同期在我院体检的180例健康已婚育龄女性为对照组，年龄为20～36岁。
1.2 病例标准观察组：①未采取避孕措施≥1年。②证实无先天性生殖系统异常、无排卵障碍、无子宫内膜异位症、无生殖系统结核。③未行盆腔手术导致盆腔脏器粘连。④配偶无生殖功能异常。对照组：以上各项正常、有正常妊娠史、无生殖系统感染及病理妊娠史。
1.3 方法 血清标本可按常规方法采集，将磷酸盐缓冲液稀释的血清加入到市售的沙眼衣原体ELISA 96孔板中37℃中孵育2h。洗版5次后，加入辣根过氧酶标记IgG二抗，在37℃中孵育30min。洗板后加入四甲基联苯胺显色剂。15分钟后终止反应，且用分光光度计在450nm处读取吸光度。根据厂家说明书判断结果。并应用金标免疫斑点实验作为对照
1.4 统计学处理 所得数据均由SPSS13.0软件统计包进行统计学处理，两组计数资料或疗效比较采用χ2检验，组间对比采用t 检验，其中以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 检测结果比较 2种不同的方法对101份不孕妇女的血清样本进行检测，检测
率分别为17.8%及9.9%，特异性和灵敏性明显优于金标法，差异具有统计学意义（p＜0.05）结果见表1。
表1ELISA和与金标法检测结果比较
金标法 ELISA法 合计
阳性 阴性
阳性 7 3 10
阴性 11 80 91
合计 18 83 101
表2ELISA法与金标法效果比较
阳性率（%） 特异性（%） 灵敏度（%）
ELISA 17.8 98.8 93.5
金标法 9.9 86.4 87.8
2．2可靠性与稳定性试验 用ELISA法对其进行可靠性试验，分3组检测出平均批间变异系数（CV）为 5.46%，分3d检测出平均批内CV为 6.78%；对其进行稳定性试验，检测出平均批间 CV为5.63%，说明该方法的具有较好的可靠性和重复性。
3.讨论
沙眼衣原体感染是一种常见病、多发病，呈全球性分布，可能半数以上世界人口曾受感染，每年发生5千万例新感染，每年100万人死亡[4]。约世界人口的5%为慢性携带者，由此可见，我国沙眼衣原体感染状况是十分严峻[5]。总之，在检测沙眼衣原体感染时要注意假阳性和假阴性结果的出现，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。也不能出现假阴性结果，以利于患者的早发现、早诊断、早治疗，采取必要的防护措施，降低我们的沙眼衣原体感染率。
我们的研究表明，对于检测沙眼衣原体抗体，ELISA试验效果好于金标实验。且ELISA 试验操作更简单。价格更低，比金标试验更具有客观性，对于检测沙眼衣原体抗体，特别是大样本资料时，因此，ELISA试验可能是检测衣原体更好的方法。
ELISA法特异性强，敏感性高，操作快速简便，因而是免疫学检验中最为常用的方法[6]，也是我们基层医院检验科免疫学检验的主要技术手段。全程质量控制很重要，我们应该注意以下几个方面：①试剂仪器：优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。②时间和温度在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间。③洗涤：洗涤在EL ISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。④显色和结果判读：显色后一定要在规定时间内进行比色。判读结果不能仅用目测，一定要用酶标仪测定，上酶标仪要注意板条各孔中比色液体积的一致，否则会产生误差。
参考文献：
[1]Muvunyi CM，Claeys L，De Sutter T，De Sutter P，Temmerman M，Van Renterghem L，Claeys G，Padalko E.Comparison of four serological assays for the diagnosis of Chlamydia trachomatis in subfertile women.J Infect Dev Ctries.2012；6（5）：396-402.
[2]Muvunyi CM，Dhont N，Verhelst R，Temmerman M，Claeys G，Padalko E.Chlamydia trachomatis infection in fertile and subfertile women in Rwanda：prevalence and diagnostic significance of IgG and IgA antibodies testing.Hum Reprod.2011；26（12）：3319-3326.